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chenglzu至尊木蟲 (著名寫手)
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[交流]
微量細胞的QPCR
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| 有沒有蟲友做過少量細胞的實時定量PCR，比如10-5000個細胞的，能不能給推薦個試劑盒或者方法？謝謝 |
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onjie
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chenglzu(金幣+2, 博學(xué)EPI+1): 2010-09-23 23:08:01
chenglzu(金幣+2): 2010-12-19 21:26:10
chenglzu(金幣+2): 2010-12-19 21:26:10
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所謂real-time Q-PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基因，利用熒光信號累積實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。在 real-time 技術(shù)的發(fā)展過程中，兩個重要的發(fā)現(xiàn)起著關(guān)鍵的作用：（1）在90年代早期，Taq DNA多聚酶的5′核酸外切酶活性的發(fā)現(xiàn)，它能降解特異性熒光記探針，因此使得間接的檢測PCR產(chǎn)物成為可能。（2）此后熒光雙標記探針的運用使在一密閉的反應(yīng)管中能實時地監(jiān)測反應(yīng)全過程。這兩個發(fā)現(xiàn)的結(jié)合以及相應(yīng)的儀器和試劑的商品化發(fā)展導(dǎo)致real-time Q-PCR方法在研究工作中的運用。 PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板，從而進入平臺期。在傳統(tǒng)的PCR 中，常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的最終擴增產(chǎn)物，因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。 理論上可以，樓主創(chuàng)新加油  |
2樓2010-09-22 00:30:02
ajzuo
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定一個 3樓2010-09-22 00:30:27
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