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herbal金蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助】關(guān)于細胞試驗 已有3人參與
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請教大家 ： 關(guān)于細胞毒性、黏附、增殖、分化試驗，這幾個之間有什么區(qū)別和聯(lián)系呢？都采用什么方法做？時間點怎么設(shè)計？要注意什么問題？ 謝謝！ |
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2樓2010-09-27 10:46:44
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3樓2010-09-27 18:29:56
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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-05-14 06:41:28
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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-05-14 06:41:28
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細胞毒性：狹義的毒性實驗和增值實驗相差不多，很多文章都是通用的。但廣義的細胞毒性試驗就有差別了。就說一下狹義的吧，毒性試驗也就是增值實驗，采用的方法一般有MTT,Alamar Blue還有檢測總的cDNA含量，這些方法都可以做。建議你看一篇文章，題目是“Analytical methods to assess nanoparticle toxicity”，是一篇綜述，很不錯。里面很系統(tǒng)的講過增值或者說毒性實驗的各種方法的優(yōu)缺點。 黏附：黏附實驗主要是檢測細胞對材料的喜好程度，如果是做那種陶瓷片或者涂層的致密材料一般都是做24h的，檢測方法有SEM和熒光染色，這兩種方法我個人覺得沒太大差別，但熒光圖一般都比較漂亮能給自己的文章加分。如果是做多孔支架材料的話，可以選擇多做幾個時間點。有文章做了1,3,7天這三個點，看的細胞在支架內(nèi)部的生長情況。看別人做的結(jié)果，還是有區(qū)別的。 增殖：同上。 分化：這塊就要看你是做什么材料了。我主要是做骨修復(fù)材料，所以一般都是檢測成骨化的表征。這方面能做的東西非常多。拿我做的方向來說明問題吧，MSC早期分化的表征一般都是選擇ALP(堿性磷酸酶)，可以做的檢測有ALP染色，也有通過pNPP方法來定量檢測材料對細胞的分化的影響。中晚期分化的表征可以檢測Osteocalcin(OC), Osteopontin(OP), BSP, ALP, Runx2這些都是成骨標(biāo)志基因，檢測方法也很多有RT-PCR，Real time RT-PCR還有熒光定量PCR，這些方法都可以用于檢測。可以根據(jù)自己的需要來做 |
7樓2011-05-13 18:57:22
諾曼底1227
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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-05-14 06:41:35
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lixiangde(金幣+1): 感謝回帖交流 2011-05-14 06:41:35
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這幾個檢測都是反映材料對細胞的影響，因為不同的實驗對材料的要求不同，有的是要求材料能殺死細胞，有的則是要求能促進細胞增殖，而且最好能誘導(dǎo)其向所需要求的方向進行分化。 時間點的設(shè)計則需要看你是做哪方面的的了，MTT一般是做1,3,5,7這三個點。Alamar Blue有每12h檢測一次，連續(xù)檢測4d的。 細胞實驗首先要知道接種細胞的數(shù)量，因為不同的檢測方法以及檢測指標(biāo)對細胞的接種數(shù)量有不同要求，而且這個接種數(shù)量和細胞的類型有很大關(guān)系，像hBMSC和rBMSC大小相差較大，所以接種數(shù)量有時候相差一個數(shù)量級 |
8樓2011-05-13 19:02:31
herbal
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9樓2011-05-16 21:29:56
諾曼底1227
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10樓2011-05-16 22:02:08
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