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【求助】更換長(zhǎng)柱子均無法得到很好的分離？ 已有1人參與
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PP-HPLC無法分開 研究對(duì)象是動(dòng)物組織的一種分子量約為10KD的蛋白（通過 SDS-PAGE檢測(cè)判定的分子量，尚未鑒定無法確定該蛋白是否有報(bào)道），具體分離純化過程所用的是酸性緩沖液，目的是通過RP-HPLC純化得到高純度的樣品進(jìn)行鑒定。有空白運(yùn)行梯度排除了梯度峰，Simadzu VP-ODS C18,4.6×150mm ,5μm柱子。1ml/min 流動(dòng)相A:0.1%TFA 水溶液，流動(dòng)相:0.08%TFA 乙腈溶液。10%A 平衡5min,30min內(nèi)梯度到60%B。延長(zhǎng)梯度時(shí)間、更換長(zhǎng)柱子均無法得到很好的分離。改善梯度條件（在10%A 平衡5min,55min內(nèi)梯度到60%B，90%B 5min 10%A 5min）峰型同前，降低進(jìn)樣濃度，換長(zhǎng)柱子也沒有改善。 [ Last edited by snowgirl10 on 2010-9-30 at 09:52 ] |
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