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炒飯大王銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】關(guān)于在蛋白質(zhì)純化過(guò)程中防止蛋白質(zhì)變性的方法 已有2人參與
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現(xiàn)在的情況是，酵母破碎后，室溫20度下，1.2h活性損失50%，0度下，5h后活性損失40%，猜測(cè)可能是破碎液中有蛋白酶，或者是目的酶極易受溫度影響，或者大家提供些可能的原因。因?yàn)閷?shí)驗(yàn)室沒(méi)有恒溫柜，只能做個(gè)冷卻夾套，或者加點(diǎn)蛋白酶抑制劑（不知哪種適用范圍廣些），或者各位提供些別的建議. 硫酸銨沉淀后，無(wú)法復(fù)溶，所以破碎后直接就到陰離子交換了，淋洗和洗脫基本都未收集到活力，操作是在室溫下進(jìn)行的，猜測(cè)可能的原因是在操作中蛋白就失活了 [ Last edited by 炒飯大王 on 2010-10-8 at 19:36 ] |
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不用別的什么建議了，馬上接著下一步，無(wú)論下一步是硫酸銨沉淀還是什么方法沉淀，有可能做了之后蛋白酶就被分離掉了。如果還不行就還是馬上做下一步，酶活力下降也可能是什么緩沖液或者什么東西對(duì)酶有害，反正就是盡快分離。 蛋白質(zhì)抑制劑也別找，先用現(xiàn)有的，摸索一下添加量梯度，做一個(gè)系列實(shí)驗(yàn)。 不知道有沒(méi)有蛋白酶就測(cè)一下蛋白酶活力，有就是有，沒(méi)有也不代表沒(méi)有，呵。 |
2樓2010-10-08 13:56:05
炒飯大王
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3樓2010-10-08 19:35:34
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