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slch007銅蟲 (小有名氣)
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【求助】用Reed-Muench method公式與Karbers公式計算的腺病毒TCID50滴度有區(qū)別嗎？
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疑問Reed-Muench method公式與Karbers公式計算的TCID50滴度有區(qū)別嗎？） 以下病毒計算方法正確嗎 腺病毒滴度測定方法： TCID50 純化前的腺病毒原液測一組，純化后的腺病毒重復(fù)測三組。 （1）將293細(xì)胞消化計數(shù)，每孔種5*103個細(xì)胞，150ul的10%血清培養(yǎng)基，待細(xì)胞長滿90%以上，可用。 （2）用無血清培養(yǎng)基每組將腺病毒稀釋10^（-7）,10^（-8）,10^（-9）,10^（-10）, 10^(-11),10^（-12），10^（-13）,10^（-14）,八個梯度。 （3）將96孔板中每孔吸出120ul培養(yǎng)基，加入100ul稀釋的腺病毒。（最終孔中的血清濃度約為2%）。留一排細(xì)胞不加病毒作為陰性對照。 （4）每個稀釋度做8個孔的重復(fù)。以觀察該孔是否出現(xiàn)CPE，確定該孔是否為陽性孔。假如某個梯度8個孔中共有5個陽性孔，則將該梯度的結(jié)果記為5/8,依次類推。 （5）整理原始數(shù)據(jù)，計算各稀釋度的陽性率。 （6）最后按照Reed-Muench method公式計算病毒滴度。 （疑問Reed-Muench method公式與Karbers公式計算的TCID50滴度有區(qū)別嗎？） 數(shù)據(jù)匯總： 病毒液滴定情況： 病毒名稱 Ad-NEP 10^-10 8/8 10^-11 7/8 10^-12 3/8 病毒液滴度計算：（ Ad-NEP） Log of virus dilution Infected test units Cumulative Infected(A) Cumulative Non-infected( B) Ratio of A/(A+B) Percent infected -10 8/8 18 0 18/18 100 -11 7/8 10 1 10/11 90.9 -12 3/8 3 5 3/8 37.5 -13 0/8 0 8 0/8 0 計算過程： Proportionate distance（Ad-NEP）=（0.909-0.5）/（0.909-0.375）=0.76 Log(ID50)=(-10)+(0.76*-1)= —10.76 則ID50=10^—10.76 則 Titer（Ad-NEP）=10*10^10.76 TCIDml-1=10^11.76 TCIDml-1 Sample Text |
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