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【求助/交流】求助 :急切! 已有11人參與
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| 求助:新測得物種的某一基因序列,測序結(jié)果出現(xiàn)很多重疊峰,請問各位師兄師姐是什么原因。自己是第一次做。謝謝! |
木蟲 (正式寫手)
清晴

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
鐵桿木蟲 (著名寫手)

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網(wǎng)上找的,共同學(xué)習(xí)! 問題1(模板中有堿基缺失,往往是單一位點(diǎn)(1-1)或兩個(gè)位點(diǎn)(1-2)堿基缺失導(dǎo)致測序結(jié)果移碼) 解決方法:將PCR 產(chǎn)物克隆到質(zhì)粒(如T 載體)中挑單克隆測序,或?qū)CR 產(chǎn)物進(jìn)行PAGE純化(至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化)后再進(jìn)行測序。 問題2(PCR 產(chǎn)物不純,含部分序列一致的兩種以上的片段,長度不一) 解決方法:主要原因是PCR 產(chǎn)物沒有純化,含有部分序列一致的兩種以上長度不一的片段,將PCR 產(chǎn)物進(jìn)行PAGE 純化(至少瓊脂糖充分電泳后切膠純化)后再進(jìn)行測序,便可解決。 |

金蟲 (正式寫手)
金蟲 (正式寫手)

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