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今天跑的菌落PCR，跑完后竟然發(fā)現(xiàn)PCR管中有白色沉淀，電泳后泳道里什么都沒(méi)有，這是怎么回事？我是將菌體加入到溶菌酶中37度作用40min，之后12000轉(zhuǎn)離心3min，取2.5ul上清作為模板跑的PCR。 25ul PCR體系如下： 2*PCR mix 12.5ul 溶菌酶消化上清（模板） 2.5ul 上游引物（20uM） 0.5ul 下游引物（20uM） 0.5ul 水 9ul 電泳結(jié)果，Marker旁邊的緊挨著的三個(gè)空白泳道就是，前面面三個(gè)是基因組DNA PCR結(jié)果  |
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3樓2010-10-24 00:01:36
怎么都行
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dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-10-24 08:41:06
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dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-10-24 08:41:06
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你的Buffer體系沒(méi)有問(wèn)題么？溶菌酶和Taq酶會(huì)不會(huì)起反應(yīng)？ 我大膽猜測(cè)一下，白色沉淀有可能是PCR產(chǎn)物析出，或者是變性的酶。 再者，你的三個(gè)空白泳道好像連引物二聚體也沒(méi)有啊 建議你用TTE緩沖液(Tris,TritonX-100和EDTA)50ul，100攝氏度裂解菌體10min.離心取1ul上清做模板�；蛘咧苯犹艟渥瞿０�。 [ Last edited by 怎么都行 on 2010-10-23 at 22:32 ] |
2樓2010-10-23 22:23:43
4樓2010-10-24 12:54:34
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5樓2010-10-24 22:43:12
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