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wyy0052銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】求教兩條互補(bǔ)的單鏈DNA 雜交條件？ 已有2人參與
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| 兩條完全互補(bǔ)的DNA鏈21bp在什么條件下能夠完全雜交，主要是溫度，和buffer的條件，有的文獻(xiàn)說(shuō)是室溫，有的說(shuō)是45度。還有雜交多少時(shí)間。 |
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lychee0924
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3樓2017-09-19 19:08:38
susizheng
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兩條單鏈DNA稀釋至1 ug/uL（1 OD260nm ssDNA=33 ug計(jì)算 ） 各取2 uL，在50 uL 100 mmol/L NaCl和10 mmol/L Tris 的緩沖體系中退火，程序?yàn)椋?0 ℃預(yù)變性3 min，緩慢冷卻到37 ℃(-0.1 ℃/S)，然后37 ℃ 保溫1 h。取3 uL電泳檢測(cè)聚合情況。 或者可以不用PCR儀，直接簡(jiǎn)單退火，將體系水浴煮沸，然后室溫自然冷卻。水浴時(shí)最好用比較大體積的水，比如2-3L，保證降溫不會(huì)太快。 下圖，40 bp單鏈退火圖片。  [ Last edited by susizheng on 2010-10-28 at 10:05 ] |
2樓2010-10-28 10:04:35
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