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apple1057新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】細(xì)胞復(fù)蘇不成功，出現(xiàn)了一些問(wèn)題。 已有10人參與
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| 大家好，我們實(shí)驗(yàn)室的細(xì)胞最近出了些問(wèn)題，每次復(fù)蘇后都長(zhǎng)得不好，形態(tài)改變而且不太增殖，最后在顯微鏡下觀察，貼壁細(xì)胞很少，我們養(yǎng)的是PIEC細(xì)胞，以前都是消化后12小時(shí)就能長(zhǎng)滿，現(xiàn)在復(fù)蘇后兩天，豐度30%左右，我們實(shí)驗(yàn)都很注意，培養(yǎng)基.血清都換了，觀察瓶?jī)?nèi)也沒(méi)有污染，我想請(qǐng)教一下這是怎么回事？謝謝 |
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2樓2010-10-28 15:12:48
apple1057
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dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-10-28 16:14:23
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dhd997(金幣+1):謝謝交流。 2010-10-28 16:14:23
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看你的描述，應(yīng)該不存在污染的問(wèn)題，細(xì)胞本身也沒(méi)問(wèn)題。 血清和培養(yǎng)液也問(wèn)題。 那么， 可能是凍存的時(shí)候出問(wèn)題了，可能是凍存液的問(wèn)題，也可能是凍存程序的問(wèn)題，也可能是手法的問(wèn)題； 也有可能是你們跟換了培養(yǎng)液，細(xì)胞對(duì)不同廠家甚至不同批次的培養(yǎng)液都會(huì)有反應(yīng)的 |
4樓2010-10-28 15:46:31
apple1057
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5樓2010-11-11 14:21:50
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6樓2010-11-11 17:10:05
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培養(yǎng)過(guò)程中大多是10%的FBS，既可以讓細(xì)胞長(zhǎng)勢(shì)良好又節(jié)省了不必要的成本；凍存時(shí)使用20%的FBS，是前輩們的一個(gè)經(jīng)驗(yàn)良方，即凍存液比例為1：2：7。在操作中，也會(huì)有不同的改變。 你的問(wèn)題或許真的就出在細(xì)胞凍存上：凍存液或者凍存程序。其結(jié)果是細(xì)胞膜已經(jīng)遭到破壞而大多死亡，復(fù)蘇當(dāng)然不能如愿了。 雖然豐度較小，但也許還可以篩選出狀態(tài)較好的細(xì)胞來(lái)吧，祝你好運(yùn)！ |
7樓2010-11-11 20:17:31
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8樓2010-11-12 10:36:43
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9樓2010-11-12 10:39:08
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10樓2010-11-13 06:28:04
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