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toni-2009金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】求教肝細(xì)胞原代培養(yǎng)! 已有8人參與
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Sample Text 前一段時(shí)間養(yǎng)了一下肝原代細(xì)胞(昆明小鼠與金黃地鼠),養(yǎng)得還行,貼壁鋪展得都很好,但是最近養(yǎng)卻貼壁還行,但是卻不鋪展開,向高手請(qǐng)教肝細(xì)胞原代培養(yǎng)應(yīng)該注意什么,有何高見!在此謝了  |
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chiscien 
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你好，我們實(shí)驗(yàn)室也在培養(yǎng)大鼠原代肝細(xì)胞，也是采用灌流法培養(yǎng)的，長(zhǎng)得都很好，現(xiàn)在對(duì)肝細(xì)胞培養(yǎng)已經(jīng)很成熟了。這個(gè)是我們實(shí)驗(yàn)的方法，希望對(duì)你有所幫助。 培養(yǎng)基本操作方法 a.將小/大鼠進(jìn)行麻醉，待其進(jìn)入深度麻醉狀態(tài)后迅速將其固定于解剖板上，于超凈臺(tái)中解剖，暴露肝臟； b.沿肝門靜脈插管固定，灌流前灌流液T1（37℃下預(yù)熱），流速5ml/min，待肝臟膨脹后迅速剪斷下腔靜脈, 灌流15min； c.前灌流液灌流完后，立即灌流后灌流液T2（37℃下預(yù)熱），流速3ml/min，5-10min； d.取下肝臟，置于平皿中，冰上剪碎肝組織，200目濾網(wǎng)過濾；用基礎(chǔ)培養(yǎng)基清洗網(wǎng)上組織； e.收集濾液，600rpm 離心2min；重復(fù)一次； f.棄上清，往沉淀中加2ml完全培養(yǎng)基，重懸細(xì)胞后，臺(tái)盼藍(lán)染色計(jì)數(shù)，將細(xì)胞接種至鼠尾膠原包被的25cm2培養(yǎng)瓶中，37℃ 5%CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)觀察。 PS:現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室要清原代細(xì)胞庫存，有需要的同行可以與我聯(lián)系哦，完全是幫大家節(jié)省時(shí)間哦。0510-86419770或者發(fā)郵件：mi.fang@chiscientific.cn |
9樓2012-05-17 14:14:43
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8樓2012-05-09 09:28:39
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