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fancylemon鐵桿木蟲 (正式寫手)
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[交流]
【求助/交流】用TAKARA的Primer STARHS DNA Polymerase 做PCR
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各位蟲友們好！我想問一下大家有關(guān)PCR的問題。 我用TAKARA的Primer STARHS DNA Polymerase ，以RT-PCR產(chǎn)物為模板做PCR，我設(shè)計了兩套引物，一個是內(nèi)部引物，一個是外部引物，內(nèi)引物和外引物之間有交叉點。也就是說用內(nèi)引物擴增出來不是全長，我的基因是1700bp的，用內(nèi)引也就1500bp吧。 我用Primer STARHS DNA Polymerase 酶，只用內(nèi)引物擴增的時候，跑電泳有很多彌散，看不到什么條帶；只用外引物擴增跑電泳也有很多彌散，但是在2000bp左右和900bp左右有兩條很暗的條帶，和我的目的1700bp的條帶不相符，這是怎么回事呢？如果用內(nèi)引物的PCR產(chǎn)物做模板，再用外引物擴增，也全是彌散。我的pcr程序是98° 10s;60° 5s;72° 1min40s;72° 6min 。那個酶的說明書上說是有2步法和3步法，我用的3步法，98° 10s;60° 5s;72° 1min40s，最后我又加上了總延伸，這樣做對么？我的跑膠結(jié)果顯示擴不出來我的目的基因，而且全是彌散？請各位蟲友指教！ |
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