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yaojixue-whx金蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助】關于siRNA 轉染... 已有2人參與
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| 懇求細胞轉染是什么意思 ？要用到siRNA，也不知道nsiRNA什么意思？謝謝，渴求答案 |
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kuyuhuashi
金蟲 (著名寫手)
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2樓2010-11-10 02:30:23
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小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
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| 常規(guī)轉染技術可分為兩大類，一類是瞬時轉染，一類是穩(wěn)定轉染（永久轉染）。前者外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，因此一個宿主細胞中可存在多個拷貝數，產生高水平的表達，但通常只持續(xù)幾天，多用于啟動子和其它調控元件的分析。一般來說，超螺旋質粒DNA轉染效率較高，在轉染后24-72小時內（依賴于各種不同的構建）分析結果，常常用到一些報告系統(tǒng)如熒光蛋白，β半乳糖苷酶等來幫助檢測。后者也稱穩(wěn)定轉染，外源DNA既可以整合到宿主染色體中，也可能作為一種游離體（episome）存在。盡管線性DNA比超螺旋DNA轉入量低但整合率高。外源DNA整合到染色體中概率很小，大約1/104轉染細胞能整合，通常需要通過一些選擇性標記，如來氨丙基轉移酶（APH；新霉素抗性基因），潮霉素B磷酸轉移酶（HPH），胸苷激酶（TK）等反復篩選，得到穩(wěn)定轉染的同源細胞系 |
3樓2012-09-11 10:50:47
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