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The phytases from Bacillus species are beta-propeller phyta- ses requiring calcium for activity and stability and exhibiting an optimum pH between 6.0 and 9.0 and are suitable for animals with neutral digestive tracts. The stability of Bacillus phytases in a high temperature range, between 60 and 95°C, is another important and useful characteristic for their application as animal feed additives because the process of pelleting uses steam and high temperatures。 In this paper, we report the cloning and expression of the phyC gene from B. subtilis VTT E-68013 using P. pastoris as the host. After 48 h of methanol induction in shake flasks, the se- lected P. pastoris GS115-PhyC strain produced and secreted an N-glycosylated form of phytase C with an extracellular phytase activity of 0.82 U/ml (71 mg of PhyC-R/liter) and a specific activity of 8.9 U/mg protein, representing 68% of the total extracellular protein (0.1 g/liter). At present, while the biopro- cess has not yet been fully optimized, we are producing PhyC-R using a 5-liter bioreactor yielding up to 12.5 U/ml phytase activity (1 g of PhyC-R/liter) in the cell-free culture medium (unpublished results) |
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2樓2010-11-12 08:15:27
wangyan820
主管區(qū)長(zhǎng)
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wd519wd706(金幣+8, 翻譯EPI+1):感謝 2010-11-15 15:38:05
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芽孢桿菌的植酸酶是beta-螺旋槳式的植酸酶，在鈣的存在下才有活性和保持穩(wěn)定性，對(duì)于消化道為中性的動(dòng)物來(lái)說(shuō)，植酸酶的最佳pH范圍為6.0- 9.0。芽孢桿菌在高溫下，如60到95°C下的穩(wěn)定性是作為動(dòng)物飼料添加劑的另一項(xiàng)重要且有用的特性，因?yàn)樵诹；倪^(guò)程中需要蒸汽和高溫。 在本篇文章中我們報(bào)道了從枯草桿菌VTT E-68013到植酸酶C基因的克隆和表達(dá)，使用巴斯德畢赤酵母為宿主。經(jīng)過(guò)在搖瓶中48 h的甲醇浸入，挑選出的巴斯德畢赤酵母GS115-植酸酶C菌種產(chǎn)生并分泌出了植酸酶C的N-糖基化的形式，且細(xì)胞外的植酸酶活性為0.82 U/ml（71 mg的PhyC-R/升），比活為8.9 U/mg，代表了68%的細(xì)胞外蛋白質(zhì)(0.1 g/升)。目前整個(gè)工藝并未完全優(yōu)化，在無(wú)細(xì)胞培養(yǎng)環(huán)境中我們使用5升的生物反應(yīng)器制得PhyC-R的植酸酶活性為12.5 U/ml（1 g of PhyC-R/升）（未見(jiàn)報(bào)道）。 由于不是生物專業(yè)的，有些可能不專業(yè)，見(jiàn)諒！ |
3樓2010-11-12 10:21:16
簡(jiǎn)單回復(fù)
2010-11-15 08:41
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