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[交流]
【求助/交流】芽孢染色做不出來，望高人指點
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| 我最近在做一個芽孢桿菌的芽孢染色，用的方法是先用5%孔雀綠加熱染色5min，水洗，番紅復染。結(jié)果是菌體全是紅色， 芽孢看不出來。有些時候水洗的不夠，全是綠色，紅色看不出來，急需解決，望高人指點。 |
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2樓2010-11-21 12:24:25
3樓2010-11-21 17:27:21
4樓2010-11-21 20:18:48
5樓2010-11-21 20:44:15
6樓2010-11-21 20:55:26
7樓2010-11-22 09:47:12
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9樓2010-11-22 15:27:07
10樓2010-11-23 09:38:12
★ ★ ★ ★ ★ ★
gao-feng(金幣+1):謝謝參與
lstt09nk(金幣+5):辛苦 2010-11-23 09:49:26
gao-feng(金幣+1):很詳細啊，但壁紙是不是你的經(jīng)驗，這些方法我在實驗書上見過，也照著做過，就是做不好。 2010-11-23 09:56:57
gao-feng(金幣+1):謝謝參與
lstt09nk(金幣+5):辛苦 2010-11-23 09:49:26
gao-feng(金幣+1):很詳細啊，但壁紙是不是你的經(jīng)驗，這些方法我在實驗書上見過，也照著做過，就是做不好。 2010-11-23 09:56:57
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基本原理 芽孢染色法是利用細菌的芽孢和菌體對染料的親合力不同的原理，用不同染料進行著色，使芽孢和菌體呈不同的顏色而便于區(qū)別。 芽孢壁厚、透性低，著色、脫色均較困難，因此，當先用一弱堿性染料，如孔雀綠（malachite green）或堿性品紅（basicfuchsin）在加熱條件下進行染色時，此染料不僅可以進入菌體，而且也可以進入芽孢，進入菌體的染料可經(jīng)水洗脫色，而進入芽孢的染料則難以透出，若再用復染液（如番紅液）或襯托溶液（如黑色素溶液）處理，則菌體和芽孢易于區(qū)分。 方法1 （Schaeffer-Fulton氏染色法） �。�1）將培養(yǎng)24小時左右的枯草芽孢桿菌或其他芽孢桿菌，作涂片、干燥、固定。 （2）滴加3—5滴孔雀綠染液于已固定的涂片上。 �。�3）用木夾夾住載玻片在火焰上加熱，使染液冒蒸汽但勿沸騰，切忌使染液蒸干，必要時可添加少許染液。加熱時間從染液冒蒸汽時開始計算約4—5分鐘。這一步也可不加熱，改用飽和的孔雀綠水溶液（約7．6％）染10分鐘。 �。�4）傾去染液，待玻片冷卻后水洗至孔雀綠不再褪色為止。 �。�5）用番紅水溶液復染1分鐘，水洗至水為無色。 �。�6）待干燥后，置油鏡觀察，芽孢呈綠色，菌體呈紅色。 注意 �。�1）選用適當菌齡的菌種，幼齡菌尚未形成芽孢，而老齡菌芽孢囊已經(jīng)破裂。 �。�2）加熱染色時必須維持在染液冒蒸汽的狀態(tài)，加熱沸騰會導致菌體或芽孢囊破裂，加熱不夠則芽孢難以著色。 方法2 （改良的Schaeffer-Fulton氏染色法） （1） 制備菌懸液 加1-2滴水于小試管中，用接種挑取2-3環(huán)菌苔于試管中，攪拌均勻，制成濃的菌懸液。所用菌種應掌握菌齡，以大部分細菌已形成孢囊為宜；取菌不宜太少。 （2） 染色 加孔雀綠2-3滴于小試管中，使其與菌液混合均勻，然后將試管置于沸水浴燒杯中，加熱染色15-20分鐘。 （3） 涂片固定 用接種環(huán)挑取試管底部菌液數(shù)環(huán)于潔凈載玻片上，涂成薄膜，然后將涂片通過火焰3次，溫熱固定。 （4） 脫色 水洗，直至流出的水無綠色為止。 （5） 復染 用番紅染液染色2-3分鐘，傾去染液并用濾紙吸干殘液。 （6） 鏡檢 干燥后，用油鏡觀察。 芽孢呈綠色，芽孢囊及營養(yǎng)體呈紅色。 |
11樓2010-11-23 09:48:13
12樓2010-12-05 09:48:12
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20樓2015-01-23 08:55:58
21樓2015-01-23 09:06:01
22樓2015-01-25 23:32:43
簡單回復
逆風草victor19樓
2015-01-23 08:46
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