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[交流]
【求助/交流】細(xì)胞被支原體污染 有救嗎
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| 我擴(kuò)PCR后，發(fā)現(xiàn)我的細(xì)胞被支原體污染了，誰知道有什么方法既能殺死支原體又能保住我的細(xì)胞嗎。萬分感謝。 |
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dhd997(金幣+3):good 2010-12-01 18:41:36
honglanbai(金幣+3): 2011-01-06 13:15:59
dhd997(金幣+3):good 2010-12-01 18:41:36
honglanbai(金幣+3): 2011-01-06 13:15:59
下面是我從小木蟲里一個(gè)熱心MM那里得來的一些經(jīng)驗(yàn)，對付細(xì)菌污染的，要不你也試試 所以處理細(xì)菌污染的重要原則就是：無限地稀釋細(xì)菌的濃度，無限地減少細(xì)菌的數(shù)量！ 1）.將污染的培養(yǎng)液倒掉，轉(zhuǎn)燒瓶口，加入10mlPBS，適當(dāng)晃動(dòng)清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。轉(zhuǎn)燒瓶口。 2）.繼續(xù)加入10mlPBS，同樣方法晃動(dòng)，清洗培養(yǎng)瓶，然后倒掉。 3）.繼續(xù)加入5mlPBS，同樣方法洗瓶，主要是培養(yǎng)面，然后倒掉。 4）.重復(fù)步驟3再洗。 5）.重復(fù)步驟3再洗。 6）.加入3-5ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。 7）.加入3ml雙抗，洗瓶，靜置3-5分鐘，然后吸出。 8）.再加入5mlPBS洗瓶，然后吸出。 9）.加入10ml培養(yǎng)液，加入2ml雙抗，放置培養(yǎng)箱培養(yǎng)，5小時(shí)之后，倒掉培養(yǎng)基，加入PBS洗瓶兩次，然后加入胰酶消化，吹打后置于離心機(jī)800-1000r/min離心，然后洗一次。置于新的培養(yǎng)瓶里培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗。 10）.24h之后，視情況換液，若仍然污染嚴(yán)重，培養(yǎng)基渾濁，重復(fù)以上步驟，若看不到污染物，則繼續(xù)步驟1)、3）、4）、6）、8），然后加入培養(yǎng)液培養(yǎng)，培養(yǎng)體系加入2ml雙抗. 11).24h之后，若仍污染嚴(yán)重，可再重復(fù)一次，若還污染只能棄之（不過一般沒有出現(xiàn)這種情況），若鏡下不見污染物，則換液PBS洗瓶，正常培養(yǎng)。 以上方法主要是針對貼壁生長的細(xì)胞，在操作的過程中，一定要小心操作動(dòng)作，輕柔緩慢，切忌大動(dòng)作魯莽。防止細(xì)胞脫落。以上方法操作得當(dāng)，基本上都能救活你的細(xì)胞（我還沒有聽到?jīng)]救活的反饋）。當(dāng)然如果你的細(xì)胞仍有富余或者凍存的，我還是建議你把污染的扔掉，再復(fù)蘇方便省事。這個(gè)拯救細(xì)胞還是主要針對你就只剩這一瓶細(xì)胞無路可退的時(shí)候。歡迎大家討論！ |
4樓2010-12-01 13:24:11
3樓2010-12-01 13:22:33
jurkat.1640
至尊木蟲 (文壇精英)
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5樓2010-12-01 16:25:04
7樓2010-12-01 18:46:26
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