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ying_cheng

金蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助】生物樣品中蛋白質(zhì)怎樣才能徹底的除干凈啊

有用無(wú)水乙醇除蛋白，但是似乎總是除的不夠干凈，有什么其他的更有效的方法嗎？或者用的比例不對(duì)？

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1樓 2010-12-07 10:49:14

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pfizer2001

金蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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常規(guī)的用乙腈來(lái)沉淀蛋白的，而不是乙醇？而乙腈沉淀蛋白屬于比較簡(jiǎn)單的步驟，更多可能會(huì)用SPE來(lái)做，你要首先研究你分析化合物的性質(zhì)，以及基質(zhì)的性質(zhì)，盡可能的消除基質(zhì)效應(yīng)的影響！

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3樓2010-12-07 12:36:10

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1445118

至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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一般用甲醇或乙腈沉淀蛋白，1:1

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2樓2010-12-07 11:54:49

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scz1985

新蟲(chóng) (初入文壇)

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用有機(jī)試劑使蛋白變性，然后過(guò)濾沉淀吧，一般用甲醇、乙腈、乙醇

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4樓2010-12-07 12:55:52

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冰片

捐助貴賓 (著名寫(xiě)手)

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甲醇沉淀肯定是可以的，但是內(nèi)源性化合物的清除是需要看情況的。
如果是臟器或者組織的話，有兩種建議：
1，加6%-8%的高氯酸溶液，優(yōu)點(diǎn)是除的比較干凈，但是樣品本身的酸堿度和無(wú)機(jī)雜質(zhì)度會(huì)有很大的變化，特別是對(duì)離子阱檢測(cè)器的影響很大。
2.，SPE，這是最好的方法，但是對(duì)于SPE的選擇是必須要注意的，往往是采用極性相反原則。此法的一個(gè)特點(diǎn)是定量應(yīng)用時(shí)，對(duì)于方法學(xué)的考察難度較大。

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5樓2010-12-07 15:37:58

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