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springsunyj至尊木蟲 (文學(xué)泰斗)
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國家自然科學(xué)基金申請經(jīng)驗(yàn)談—申請成功角度(轉(zhuǎn)貼) 已有8人參與
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國家自然科學(xué)基金申請經(jīng)驗(yàn)談—申請成功角度 轉(zhuǎn)自曾慶平的博客 2008年，我們申請的國家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目“青蒿CYP71AV1基因人工進(jìn)化及青蒿素全合成酵母工程菌構(gòu)建”成功獲得資助！以下是生命科學(xué)部微生物組寄來的同行評議意見： 第一位評委的意見 1.青蒿素可以抗瘧原蟲，具有重要的藥用價(jià)值。本項(xiàng)目擬將CYP71AV1基因通過DNA shuffling定向進(jìn)化后，連同反義鯊烯合酶、CPR一起，導(dǎo)入紫穗槐二烯酵母工程菌，人為地創(chuàng)造合成青蒿素的代謝途徑，誘導(dǎo)青蒿素的合成，從而構(gòu)建能高效合成青蒿素的酵母工程菌，為青蒿素的全微生物合成奠定基礎(chǔ)。 2.該項(xiàng)目目標(biāo)明確，實(shí)驗(yàn)手段先進(jìn)，技術(shù)路線比較合理。通過定向進(jìn)化CYP71AV1基因，改變該酶的催化活性，構(gòu)建直接由紫穗槐二烯合成青蒿素的工程菌，抓住了需要解決的關(guān)鍵問題，具有原始創(chuàng)新性。 3.但CYP71AV1基因通過DNA shuffling定向進(jìn)化后如何篩選目的基因，申請者提出的方案還有待改進(jìn)，如如何將目的基因正確地連接到載體上讓其表達(dá)，是一個很關(guān)鍵的問題，作者沒有提出解決辦法，ADS/CYP/CPR基因在酵母中共表達(dá)的穩(wěn)定性、三個基因產(chǎn)物之間的比例關(guān)系，也值得考慮。同時，沒有提出表達(dá)青蒿素的具體指標(biāo)。 4.本項(xiàng)目具有較好的研究基礎(chǔ)，可以繼續(xù)進(jìn)行資助。 第二位評委的意見 該項(xiàng)目以青蒿CYP71AV1基因作為研究對象,設(shè)計(jì)青蒿素合成的酵母工程菌株。結(jié)合了植物天然藥物在酵母細(xì)胞中表達(dá)的先進(jìn)手段，具有一定的創(chuàng)新性和基礎(chǔ)研究意義。 該項(xiàng)目申請者對青蒿素的合成機(jī)制和在原核生物中的分子該性等方面的研究有較深入的了解和合理的推斷，由此對研究方案提出系統(tǒng)的研究方案，并根據(jù)青蒿素的生物代謝途徑中的相關(guān)基因進(jìn)行DNA shuffling，隨著篩選平臺的完善，將篩選出代謝通量改變后的青蒿素生物合成的關(guān)鍵基因。 但申請者對研究過程中大量代謝物的分析上還存在一定的薄弱環(huán)節(jié)，還應(yīng)采取更為全面的分析測試手段，對代謝工程研究過程中進(jìn)行多方位的檢測，以說明通過DNA shuffling以后代謝流改變的具體過程。 該研究團(tuán)隊(duì)具有較好的前期工作作為此次研究的背景，具有良好的團(tuán)隊(duì)組合和較高的科研素質(zhì)，具有完成此項(xiàng)研究的基本保障。 建議優(yōu)先支持該課題。 第三位評委的意見 申請人擬利用酵母菌異源表達(dá)合成青蒿素，具有重要意義和一定創(chuàng)新性。申請人通過前期的工作，積累了開展該工作的基礎(chǔ)。申請人擬通過DNA shuffling技術(shù)獲得所需cyp基因，具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性�？赡苄枰髡呖紤]更多的方案克隆該基因。建議資助該項(xiàng)目。 專家評審組意見 投票過半數(shù)，建議資助。 從以上評審意見可以看出，專家最推崇原始創(chuàng)新性！如果你在準(zhǔn)備申請前，心中已經(jīng)醞釀出一個“好點(diǎn)子”，應(yīng)該說就已經(jīng)成功了一半！由于目前國內(nèi)外開展青蒿素的微生物生產(chǎn)都只是獲得前體而未獲得青蒿素，因此留下很大的研究空間。但是，國外團(tuán)隊(duì)資金雄厚、人才濟(jì)濟(jì)，憑什么讓評委相信外國人還沒有做出來的東西我們能做出來呢？關(guān)鍵是我們想出了“好點(diǎn)子”，那就是通過“基因洗牌”改造酶分子！ 其次，專家也看好我們的研究背景及工作積累。我們從2000年開始涉足青蒿素高產(chǎn)研究，先是在青蒿中利用基因打靶技術(shù)進(jìn)行代謝工程研究，以大幅度提高青蒿素含量，然后試圖在微生物（酵母）中合成青蒿素，并在2006年中標(biāo)一項(xiàng)前期課題——“青蒿素生物合成途徑的局部重建及青蒿素前體的生物轉(zhuǎn)化”，整個研究團(tuán)隊(duì)的研究工作流程具有連續(xù)性，研究水平與國外同行相比也不落后多少。 再次，專家認(rèn)可我們的良好的團(tuán)隊(duì)組合和較高的科研素質(zhì)，被認(rèn)為是完成此項(xiàng)研究的基本保障。一個團(tuán)隊(duì)的成員過去取得怎樣的成績，決定了評委對該項(xiàng)目的完成是否存在某種擔(dān)心的程度，而讓他們吃下“定心丸”的關(guān)鍵因素是每個成員都不是“吃閑飯”的，而且實(shí)力比較平均。 另外，專家在肯定項(xiàng)目實(shí)施可行性的同時，也不忌諱指出研究設(shè)計(jì)的不足之處。例如：“如何將目的基因正確地連接到載體上讓其表達(dá)是一個很關(guān)鍵的問題，作者沒有提出解決辦法；ADS/CYP/CPR基因在酵母中共表達(dá)的穩(wěn)定性、三個基因產(chǎn)物之間的比例關(guān)系，也值得考慮；沒有提出表達(dá)青蒿素的具體指標(biāo)”；“申請者對研究過程中大量代謝物的分析上還存在一定的薄弱環(huán)節(jié)，還應(yīng)采取更為全面的分析測試手段，對代謝工程研究過程中進(jìn)行多方位的檢測，以說明通過DNA shuffling以后代謝流改變的具體過程”；“申請人擬通過DNA shuffling技術(shù)獲得所需cyp基因，具有一定的風(fēng)險(xiǎn)性，可能需要作者考慮更多的方案克隆該基因”。然而，這樣的擔(dān)心絲毫不影響他們的評判結(jié)果：同意資助！ 因此，我認(rèn)為，一項(xiàng)成功的申請至少需要三大要素：創(chuàng)新、基礎(chǔ)和團(tuán)隊(duì)，缺一不可！ [ Last edited by springsunyj on 2010-12-11 at 21:37 ] |
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