yangsitao

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[交流] 【求助】小鼠各個器官的組織勻漿怎么制備

想要做小鼠的藥物組織分布，可是不知道該怎么制備各個器官的組織勻漿？
各位大俠能否給點具體的制備方法。就是這么怎么制備需要注意什么事項

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1樓 2010-12-16 18:25:40

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王品三

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1、取肝臟1g，在冰冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，稱重，放入5或10ml的小燒杯內(nèi)
2、用移液管量取0.86％冷生理鹽水，生理鹽水的體積總量應該是組織塊重量的9倍，用移液管或移液器取總量的2/3的勻漿介質(zhì)或生理鹽水于燒杯中，用眼科小剪盡快剪碎組織塊（天然時操作要在冰水浴中進行，將盛有組織的小燒杯放入冰水中）。
3、手工勻漿：將剪碎的組織倒入玻璃勻漿管中，再將剩余的1/3勻漿介質(zhì)或生理鹽水沖洗殘留在燒杯中的碎組織塊，一起倒入勻漿管中進行勻漿，左手持勻漿管將下端插入盛有冰水混合物的器皿中，右手將搗桿垂直插入套管中，上下轉(zhuǎn)動研磨數(shù)十次（6～8分鐘），充分研碎，使組織勻漿化。
4、將制備好的10％勻漿用普通離心機或低溫低速離心機3000r/min左右離心10～15分鐘，若檢測ATP酶，則只需要1000轉(zhuǎn)/分，離心5分鐘，將離心好的勻漿留下上清棄下面沉淀。
根據(jù)你的實驗需要，取適量上清夜進行各種測定。

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12樓2012-06-15 14:56:49

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sjfovercom

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yangsitao(金幣+2): 2010-12-20 11:07:19

我們以前做過小鼠腦，子宮的勻漿，是先加少許生理鹽水到小號的勻漿器里。然后在冰水浴里操作，動作要輕柔。用滴管取出勻漿液，離心取上清。
注意:1.組織會貼在勻漿器的壁上，所以制備的時候要觀察是否勻漿器里還有剩余組織。2.冰水浴很重要，保證組織里面的成分不流失，測指標好點。3.勻漿操作要輕柔，會產(chǎn)生泡沫。4.加少許生理鹽水不能太多，要不然不好操作。還有些注意點自己小心操作就可以。

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7樓2010-12-17 09:51:51

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yll120166

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qinhy(金幣+1):多謝指教，歡迎常來藥學版！ 2010-12-19 15:53:55
yangsitao(金幣+2): 2010-12-20 11:07:02
yangsitao(金幣+1): 2010-12-22 19:24:03

我做過大鼠的組織分布，我們是按0.5g組織：1ml生理鹽水，像組織比較少的（少于0.5g）就加0.5ml生理鹽水，在10ml的EP管里勻漿，用的電動勻漿器。如果手動的話一個是太慢，一個是損失多，要是樣本多時間長也怕樣品不穩(wěn)定。所以電動的還是好些，幾個人配合一起，有切的，有稱重加生理鹽水的和勻漿的。我們有時候樣多，一勻就是一天。

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8樓2010-12-17 20:36:52

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880110sj

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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖

一般現(xiàn)在都是用超聲勻漿，應該在冰上進行

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11樓2011-04-30 15:12:52

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wld200106

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2樓2010-12-16 18:48:30

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yll120166

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karl2100(金幣+1):謝謝回帖！ 2010-12-16 22:21:45
yangsitao(金幣+2):可不可具體點，我從來沒做過，比如具體步驟什么來的， 2010-12-16 22:30:53

按一定的比例加生理鹽水，用組織勻漿機制備勻漿，具體比例自己根據(jù)試驗定。

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3樓2010-12-16 19:24:45

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大學實驗基本上都是用玻璃勻漿器進行勻漿的
不知道有沒有誤差

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4樓2010-12-16 23:44:57

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a83875785

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dream意(金幣+1):謝謝回帖交流 2011-01-04 17:43:42

用組織勻漿機吧，然后自己摸條件提取組織樣品（如蛋白沉淀或液液萃取等），然后進儀器測定。

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5樓2010-12-17 00:07:07

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lihuiljj

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6樓2010-12-17 08:56:33

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lavender169

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dream意(金幣+2):謝謝回帖交流 2011-01-04 17:43:54

做蛋白的話就要求有裂解液（ripa）和蛋白酶抑制劑（PMSF或者cocktail）首先加入預冷的裂解液和蛋白酶抑制劑然后去小塊組織放入玻璃勻漿器中，勻漿30min 動作輕柔要不好多氣泡操作過程在冰上進行。

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9樓2011-01-04 12:58:11

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richfish

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karl2100(金幣+1):謝謝參與討論！ 2011-01-09 20:32:38

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10樓2011-01-09 19:29:27

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tq冉

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10樓: Originally posted by richfish at 2011-01-09 19:29:27
建議找臺勻漿機，手工勻漿缺陷很多。這不光是速度的問題，還有待測化合物在組織中是否穩(wěn)定的問題。
可以用生理鹽水做為勻漿液，也可以用1:1的甲醇水作為勻漿液。假如僅僅是做樣品分析，建議用甲醇水。

您好，請問您說的甲醇水是甲醇生理鹽水還是甲醇超純水？

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13樓2016-11-07 22:05:58

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