當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

jqq1985

版主

應(yīng)助: 52 (初中生)
金幣: 394.3
帖子: 443
在線: 36.2小時(shí)
蟲號: 583567

[交流] 【求助/交流】BL21(DE3) 在M9中發(fā)生自溶

最近在做蛋白的標(biāo)記，用的是BL21（DE3），開始用4mlLB搖菌搖濃，然后轉(zhuǎn)1ml到70mlM9中擴(kuò)大，最后轉(zhuǎn)入700 ML M9中再放大并誘導(dǎo)表達(dá)。做的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌在LB中生長穩(wěn)定，轉(zhuǎn)入小體積M9中和大體積M9中會(huì)發(fā)生自溶現(xiàn)象！有時(shí)候在70ml中自溶，有時(shí)候在大瓶中自溶。具體表現(xiàn)為，細(xì)菌OD長不上去。最近兩次，一次在大瓶中，小瓶子搖濃后，轉(zhuǎn)入大瓶中，OD長到0.5就上不去，然后菌體溶解；另一次是1ml轉(zhuǎn)入小瓶中，搖過夜早上過來發(fā)現(xiàn)出現(xiàn)同樣的問題。同實(shí)驗(yàn)室的人，有將種子按相同條件接入M9中，結(jié)果一瓶自溶，一瓶能正常生長。因?yàn)樽鰳?biāo)記，不可以使用M9+LB混合培養(yǎng)基，以及添加額外的碳源和氮源。求高手解答！

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

309分085801求調(diào)劑已經(jīng)有7人回復(fù)
生物學(xué)308分求調(diào)劑（一志愿華東師大）已經(jīng)有3人回復(fù)
求調(diào)劑：一志愿：南京大學(xué) 專業(yè)：0705 總分320 ，本科985，四六級已過已經(jīng)有3人回復(fù)
環(huán)境工程 085701，267求調(diào)劑已經(jīng)有14人回復(fù)
308求調(diào)劑已經(jīng)有12人回復(fù)
求調(diào)劑：085600材料與化工，考材科基，總分319 已經(jīng)有21人回復(fù)
311求調(diào)劑已經(jīng)有8人回復(fù)
294分080500材料科學(xué)與工程求調(diào)劑已經(jīng)有13人回復(fù)
288求調(diào)劑一志愿哈工大材料與化工已經(jīng)有19人回復(fù)
288資源與環(huán)境專碩求調(diào)劑，不限專業(yè)，有學(xué)上就行已經(jīng)有23人回復(fù)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對您同樣有幫助:

大家的申報(bào)材料所處的狀態(tài)現(xiàn)在都是什么啊？已經(jīng)有18人回復(fù)
LB 和 M9的培養(yǎng)液哪一個(gè)在工業(yè)界成本更低，M9 替代LB 有必要嗎？已經(jīng)有14人回復(fù)
PK/PD模型是否必須在病理動(dòng)物上做?? 已經(jīng)有6人回復(fù)
在留學(xué)申請過程中遇見的一個(gè)計(jì)算機(jī)問題，急已經(jīng)有2人回復(fù)
導(dǎo)致微生物自溶的原因有哪些？已經(jīng)有7人回復(fù)
求解：聚氨酯合成中發(fā)生凝膠現(xiàn)象已經(jīng)有19人回復(fù)
M9培養(yǎng)基MgSO4和CaCl2可以跟其他混一起滅菌嗎？已經(jīng)有17人回復(fù)
【求助/交流】pET29a轉(zhuǎn)化E.coli BL21 已經(jīng)有4人回復(fù)
【求助/交流】菌體自溶已經(jīng)有13人回復(fù)
【求助/交流】菌體自溶是什么原因？已經(jīng)有28人回復(fù)
【求助/交流】大腸桿菌BL21的問題已經(jīng)有4人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2010-12-21 09:58:17

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

susizheng

主管區(qū)長

jqq1985(金幣+2): 2010-12-21 13:03:47

引用回帖:

Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 11:12:48:

是這樣的，我自溶后溶液會(huì)變得澄清，同時(shí)有絮狀物，絮狀物的多少與自溶前的菌體量有關(guān)。有什么好的方法來保證不發(fā)生自溶嗎，M9配方中的維生素和微量礦物質(zhì)都加了，也沒有什么太大改善。應(yīng)該不是噬菌體，因?yàn)�，�?shí) ...

試劑都新配試試看，用太久的母液容易出問題。

贊一下

回復(fù)此樓

4樓2010-12-21 11:17:45

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 7 個(gè)回答

susizheng

兌換貴賓

★
jqq1985(金幣+2): 2010-12-21 11:13:29
rainwander(金幣+1):鼓勵(lì)積極參與~~~~ 2010-12-21 11:23:46

這個(gè)問題我們實(shí)驗(yàn)室也經(jīng)常出現(xiàn)�？茨阕匀芎笈囵B(yǎng)基中是否有絮狀沉淀生成，如果有，說明只是一般的試劑污染，解決辦法是，M9的分開配置的母液一次不要配太多，最好還是現(xiàn)用現(xiàn)配。如果自溶后，培養(yǎng)基澄清，那就可能噬菌體污染了，問題就嚴(yán)重了。

贊一下(1人)

回復(fù)此樓

2樓2010-12-21 10:51:08

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jqq1985

專家顧問

應(yīng)助: 52 (初中生)
金幣: 394.3
帖子: 443
在線: 36.2小時(shí)
蟲號: 583567

引用回帖:

Originally posted by jqq1985 at 2010-12-21 09:58:17:
最近在做蛋白的標(biāo)記，用的是BL21（DE3），開始用4mlLB搖菌搖濃，然后轉(zhuǎn)1ml到70mlM9中擴(kuò)大，最后轉(zhuǎn)入700 ML M9中再放大并誘導(dǎo)表達(dá)。做的過程中發(fā)現(xiàn)，細(xì)菌在LB中生長穩(wěn)定，轉(zhuǎn)入小體積M9中和大體積M9中會(huì)發(fā)生自溶現(xiàn)象 ...

是這樣的，我自溶后溶液會(huì)變得澄清，同時(shí)有絮狀物，絮狀物的多少與自溶前的菌體量有關(guān)。有什么好的方法來保證不發(fā)生自溶嗎，M9配方中的維生素和微量礦物質(zhì)都加了，也沒有什么太大改善。應(yīng)該不是噬菌體，因?yàn)�，�?shí)驗(yàn)室中沒有做噬菌體的，并且，同一個(gè)瓶子上次用好好的，這次就會(huì)自溶下次又不會(huì)了。

贊一下

回復(fù)此樓

3樓2010-12-21 11:12:48

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

jqq1985

版主

應(yīng)助: 52 (初中生)
金幣: 394.3
帖子: 443
在線: 36.2小時(shí)
蟲號: 583567

引用回帖:

Originally posted by susizheng at 2010-12-21 11:17:45:

試劑都新配試試看，用太久的母液容易出問題。

我的培養(yǎng)基都是現(xiàn)配現(xiàn)滅的。不使用母液儲(chǔ)存。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2010-12-21 13:03:36

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 349求調(diào)劑 +4	zwjjjjjj 2026-03-31	4/200	2026-03-31 21:00 by yuq
[考研] 085600 一志愿9 總分351 求調(diào)劑學(xué)校 +7	czhcz 2026-03-31	7/350	2026-03-31 18:54 by 小張做實(shí)驗(yàn)
[考研] 材料科學(xué)與工程339求調(diào)劑 +3	hyz0119 2026-03-31	3/150	2026-03-31 18:31 by 1939136013狗壯
[考研] 318求調(diào)劑 +10	陳晨79 2026-03-30	10/500	2026-03-31 17:37 by 544594351
[考研] 求調(diào)劑生物學(xué) 377分 +6	zzll03 2026-03-31	6/300	2026-03-31 17:33 by 唐沐兒
[考研] 085600 材料與化工 329分求調(diào)劑 +20	Mr. Z 2026-03-25	21/1050	2026-03-31 16:53 by Zzxxxs
[考研] 311求調(diào)劑 +9	藍(lán)月亮亮 2026-03-30	9/450	2026-03-31 16:32 by yedezhan
[考研] 085601 材料工程 313分求調(diào)劑 +6	Ong3 2026-03-27	6/300	2026-03-31 15:18 by yanflower7133
[考研] 求收留 +8	1943443204 2026-03-28	8/400	2026-03-31 15:00 by -迷了路啊路
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +4	崔wj 2026-03-31	4/200	2026-03-31 11:56 by jp9609
[考研] 一志愿中海洋320化學(xué)工程與技術(shù)學(xué)碩求調(diào)劑 +8	披星河 2026-03-30	8/400	2026-03-31 08:53 by lbsjt
[考研] 求調(diào)劑 +10	家佳佳佳佳佳 2026-03-29	10/500	2026-03-30 18:34 by 544594351
[考研] 310求調(diào)劑 +10	爭取九點(diǎn)睡 2026-03-30	10/500	2026-03-30 16:45 by ztnimte
[考研] 337求調(diào)劑 +6	《樹》 2026-03-29	6/300	2026-03-30 10:15 by herarysara
[考研] 321求調(diào)劑 +7	璞玉~~ 2026-03-25	8/400	2026-03-29 06:41 by 544594351
[考研] 086502化學(xué)工程342求調(diào)劑 +6	阿姨復(fù)古不過 2026-03-27	6/300	2026-03-28 07:06 by wangy0907
[考研] 265求調(diào)劑 +8	小木蟲085600 2026-03-27	8/400	2026-03-27 22:16 by 無際的草原
[考研] 265求調(diào)劑11408 +3	劉小鹿lu 2026-03-27	3/150	2026-03-27 20:53 by nihaoar
[考研] 085600，材料與化工321分，求調(diào)劑 +9	大饞小子 2026-03-27	9/450	2026-03-27 14:30 by mmm just
[考研] 302求調(diào)劑 +4	錦衣衛(wèi)藤椒 2026-03-25	4/200	2026-03-25 16:29 by 功夫瘋狂