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[交流] 【求助/交流】間接Elisa中，抗原濃度越高，陽性值反而越低？

本人用自己表達(dá)的抗原純化后做間接Elisa，當(dāng)包被濃度為0.5ug/ml包被100ul)，陽性值OD大概在1.2左右，陰性值在0.1以下，可是當(dāng)我提高抗原的濃度（二抗稀釋度相同的條件下），陽性值反而降低，但是陰性值是稍微升高的，重復(fù)過好幾次都是這樣，不知道是什么原因？有經(jīng)驗(yàn)的前輩指點(diǎn)下，萬分感激！！
抗原濃度二抗稀釋度 "陽性" 陰性
0.7ug/ml       2萬       1.872    0.278
      4萬       1.354    0.16
1.4ug/ml       2萬 1.923 0.271
   4萬 1.181 0.171
   6萬 0.7 0.127
2.8ug/ml 2萬 1.388 0.361
4萬 0.841 0.198
6萬 0.503 0.125
抗原濃度二抗稀釋度陽性       陰性
0.5ug/ml 2萬 1.225 0.054
4萬 0.807 0.034
6萬 0.56 0.028
8萬 0.326 0.032
1ug/ml 2萬 1.267 0.073
4萬 0.715 0.06
6萬 0.451 0.053
8萬 0.364 0.057

[ Last edited by zsm0507 on 2010-12-22 at 10:33 ]

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1樓 2010-12-22 10:18:20

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zhfb619ncu

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dhd997(金幣+1):鼓勵(lì)交流 2010-12-23 08:41:41
zsm0507(金幣+2):謝謝您的解答 2010-12-23 11:59:16
zsm0507(金幣+2): 2011-05-05 08:57:38

是不是你的操作過程的某個(gè)環(huán)節(jié)出錯(cuò)了？或者是你的抗原變質(zhì)了呢，你的抗原是自己提取的么？

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2樓2010-12-22 12:50:58

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Originally posted by zhfb619ncu at 2010-12-22 12:50:58:
是不是你的操作過程的某個(gè)環(huán)節(jié)出錯(cuò)了？或者是你的抗原變質(zhì)了呢，你的抗原是自己提取的么？

操作過程不會(huì)出錯(cuò)，抗原剛純化沒多久的，再說，抗原要是變質(zhì)了，也是沒有活性，陽性值肯定很低，現(xiàn)在的問題是，超過一定濃度，增加抗原的濃度，陽性O(shè)D值反而沒有增加，甚至降低，不知道什么原因？

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3樓2010-12-22 16:18:28

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dhd997(金幣+2):謝謝交流 2010-12-23 08:41:50
zsm0507(金幣+2): 2011-05-05 08:59:57

你的數(shù)據(jù)排列不整齊，沒有仔細(xì)看。但是針對(duì)的你的問題有一種解釋就是抗原抗體的反應(yīng)的三個(gè)過程，這個(gè)在很多書上都有講。當(dāng)?shù)鞍走^量的時(shí)候（即超過最佳結(jié)合比例），包被的抗原太多了，形成空間位阻，會(huì)干擾抗體的結(jié)合，結(jié)合的抗體少了，當(dāng)然OD值就下來了。所以建立方法的時(shí)候一般都會(huì)用用方針法確定一個(gè)大致的抗原抗體濃度。

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4樓2010-12-22 17:49:08

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Originally posted by dianaofyezi at 2010-12-22 17:49:08:
你的數(shù)據(jù)排列不整齊，沒有仔細(xì)看。但是針對(duì)的你的問題有一種解釋就是抗原抗體的反應(yīng)的三個(gè)過程，這個(gè)在很多書上都有講。當(dāng)?shù)鞍走^量的時(shí)候（即超過最佳結(jié)合比例），包被的抗原太多了，形成空間位阻，會(huì)干擾抗體的結(jié) ...

首先非常感謝您的耐心解答，如果是抗原過量的話，為什么我的抗原包被濃度那么低才0.5ug/ml就可以了，當(dāng)濃度甚至多于1ug/ml的時(shí)候抗原就過量了呢，我一開始也是覺得可能是抗原過量，可是，用的抗原濃度并不是很高，所以我就想是不是還有其他方面的原意呀？

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5樓2010-12-23 08:22:29

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dhd997(金幣+2):鼓勵(lì)熱心交流 2010-12-23 08:57:49
zsm0507(金幣+8):謝謝您的耐心解答和指導(dǎo)！ 2010-12-23 11:57:06

這個(gè)抗原過量和你的抗體濃度有關(guān)的，而不是相對(duì)你包被的濃度而言的。當(dāng)然有這樣現(xiàn)象的原因會(huì)比較多，所以需要其他實(shí)驗(yàn)排除下。至少首先應(yīng)該要排除的是不是因?yàn)椴僮髟蛞鸬?

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6樓2010-12-23 08:46:31

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Originally posted by dianaofyezi at 2010-12-23 08:46:31:
這個(gè)抗原過量和你的抗體濃度有關(guān)的，而不是相對(duì)你包被的濃度而言的。當(dāng)然有這樣現(xiàn)象的原因會(huì)比較多，所以需要其他實(shí)驗(yàn)排除下。至少首先應(yīng)該要排除的是不是因?yàn)椴僮髟蛞鸬?

那請(qǐng)問除了抗原包被濃度過高之外，還有什么其他原因會(huì)造成這種現(xiàn)象呀？

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7樓2010-12-23 15:11:37

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這個(gè)有點(diǎn)難度，要看實(shí)際的數(shù)據(jù)決定哦，我也沒有看到你其他檢測(cè)數(shù)據(jù)哦。例如說增加抗體濃度，OD值會(huì)怎么變化？你做的方針結(jié)果如何？二抗?jié)舛鹊母淖冇墒裁醋兓�？等�?

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8樓2010-12-23 18:16:13

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Originally posted by dianaofyezi at 2010-12-23 18:16:13:
這個(gè)有點(diǎn)難度，要看實(shí)際的數(shù)據(jù)決定哦，我也沒有看到你其他檢測(cè)數(shù)據(jù)哦。例如說增加抗體濃度，OD值會(huì)怎么變化？你做的方針結(jié)果如何？二抗?jié)舛鹊母淖冇墒裁醋兓�？等�?

我上面寫得數(shù)據(jù)上有的，二抗?jié)舛仍黾覱D值是升高的。

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10樓2010-12-28 09:14:01

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陶然悅

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

是不是因?yàn)闈舛鹊统霈F(xiàn)了非特異反應(yīng)，所以值比較高呢?

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11樓2014-07-06 12:44:19

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簡(jiǎn)單回復(fù)

dashu-973329樓

2010-12-23 21:42 回復(fù)

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