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westlover

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[交流] 【求助】細(xì)胞培養(yǎng)中金屬圓片試樣的尺寸小于培養(yǎng)板孔徑尺寸怎么辦？

打算做細(xì)胞試驗(yàn)，但是培養(yǎng)板孔徑尺寸比試樣大，試樣放進(jìn)去后留有很大的間隙，教授說，細(xì)胞會(huì)自動(dòng)選擇位置較低的地方聚集，也就是說，細(xì)胞會(huì)慢慢遷移到間隙中去，那樣的話，細(xì)胞附著、細(xì)胞增殖的數(shù)據(jù)就不準(zhǔn)了，怎么辦呢？
培養(yǎng)板是標(biāo)準(zhǔn)24孔，孔徑不能變小，金屬試樣是委托企業(yè)加工的，也不好改尺寸，請問大家有什么好辦法嗎？

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1樓 2010-12-24 08:31:57

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firebolt

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westlover(金幣+5):謝謝。 2010-12-24 09:53:45
shileinjut(金幣+1):謝謝參與！ 2010-12-24 12:07:00

問題不大，我們做凝膠上細(xì)胞增值的時(shí)候試樣也是要比孔板小一些的，你可以等細(xì)胞貼壁之后將試樣轉(zhuǎn)移到新的孔里，48孔板能放進(jìn)你的試樣嗎

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2樓2010-12-24 08:53:25

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Originally posted by firebolt at 2010-12-24 08:53:25:
問題不大，我們做凝膠上細(xì)胞增值的時(shí)候試樣也是要比孔板小一些的，你可以等細(xì)胞貼壁之后將試樣轉(zhuǎn)移到新的孔里，48孔板能放進(jìn)你的試樣嗎

試樣的直徑是15mm，24孔的孔徑是15.6mm，48孔的板子孔徑就太小了。
也就是說，種植的時(shí)候細(xì)胞懸浮液的濃度要盡量大，液滴要盡量小是嗎？
要等多長時(shí)間才能轉(zhuǎn)移到新孔里呢?
此外，我要測量種植1小時(shí)、3小時(shí)、7小時(shí)后的貼壁數(shù)量，如果那樣的操作的話，是不是就不行啦？

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3樓2010-12-24 09:57:49

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有個(gè)實(shí)驗(yàn)室的辦法是：提高懸浮液的細(xì)胞濃度，保證每孔種植細(xì)胞數(shù)量的前提下，先滴在試樣中心滴大概70μL懸浮液，這樣，懸浮液會(huì)完全覆蓋試樣，但不會(huì)流出去。在CO2培養(yǎng)箱中靜置30分鐘后，再向孔中加入930μL培養(yǎng)液。他們一直使用這種方法，不知可取不？

[ Last edited by westlover on 2010-12-24 at 12:53 ]

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4樓2010-12-24 12:48:06

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dj04164

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westlover(金幣+5):謝謝！ 2010-12-24 15:40:46
yusen_1982(金幣+1):歡迎討論！ 2010-12-24 17:32:48

不知道你用的是什么細(xì)胞，大部分貼壁細(xì)胞會(huì)不在貼壁后1-7小時(shí)遷移太多如果你的樣品有一定厚度，對細(xì)胞來說從樣品上下來就更困難了。
這樣做，先把細(xì)胞懸液配好，濃度即為培養(yǎng)細(xì)胞濃度。24孔板每孔1ml緩緩加入即可
不同細(xì)胞貼壁時(shí)間差異很大。細(xì)胞一般在貼壁后若干小時(shí)開始細(xì)胞周期。你可以先試試看，種在dish里隔半個(gè)小時(shí)觀察一下，會(huì)看到懸浮〉下沉〉貼壁開始（圓形）〉完全貼壁〉偽足伸出。測試細(xì)胞周期就需要首先對其同步化，分不同時(shí)間點(diǎn)收集數(shù)據(jù)。

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5樓2010-12-24 14:50:07

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Originally posted by dj04164 at 2010-12-24 14:50:07:
不知道你用的是什么細(xì)胞，大部分貼壁細(xì)胞會(huì)不在貼壁后1-7小時(shí)遷移太多如果你的樣品有一定厚度，對細(xì)胞來說從樣品上下來就更困難了。
這樣做，先把細(xì)胞懸液配好，濃度即為培養(yǎng)細(xì)胞濃度。24孔板每孔1ml緩緩加入即可 ...

謝謝！我打算用鼠MC3T3-E1細(xì)胞，一種osteblast-like細(xì)胞，是貼壁細(xì)胞。我們的試樣厚度是1.0mm。
呵呵，我仔細(xì)問了下教授，他真正擔(dān)心的是，培養(yǎng)板的細(xì)胞附著性能很好，如果將懸浮液直接注入孔中，大量的細(xì)胞會(huì)附著在孔壁而不是試樣上……，他的擔(dān)心是不是多余的？我沒有發(fā)現(xiàn)任何文章討論間隙以及培養(yǎng)板孔壁吸引細(xì)胞的問題的，不過大部分文章都沒有給出細(xì)胞種植的細(xì)節(jié)。
上面我提到的那個(gè)“droplet”方法有可行性嗎？那么多細(xì)胞，那么少的培養(yǎng)液體積，密度太高了吧，細(xì)胞會(huì)不會(huì)死掉？

[ Last edited by westlover on 2010-12-24 at 15:54 ]

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6樓2010-12-24 15:46:05

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shileinjut(金幣+1):謝謝參與！ 2010-12-25 00:39:46
westlover(金幣+3): 2010-12-28 10:27:48

引用回帖:

Originally posted by westlover at 2010-12-24 15:46:05:

謝謝！我打算用鼠MC3T3-E1細(xì)胞，一種osteblast-like細(xì)胞，是貼壁細(xì)胞。我們的試樣厚度是1.0mm。
呵呵，我仔細(xì)問了下教授，他真正擔(dān)心的是，培養(yǎng)板的細(xì)胞附著性能很好，如果將懸浮液直接注入孔中，大量的細(xì)胞 ...

如果只是擔(dān)心這個(gè)的話，問題不大，正常操作就行，0.6mm的縫隙沒有什么關(guān)系
當(dāng)然如果按照你上面提到的方法我相信沒有問題

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7樓2010-12-24 21:30:35

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shileinjut(金幣+1):謝謝參與！ 2010-12-25 00:39:39
westlover(金幣+5):謝謝 2010-12-25 06:54:44

引用回帖:

放心干吧，這個(gè)細(xì)胞我種過，遷移性極差，基本上就是不會(huì)動(dòng)。trypsin的時(shí)候拿到新孔里面。不用擔(dān)心

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8樓2010-12-24 23:31:37

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Originally posted by dj04164 at 2010-12-24 23:31:37:

放心干吧，這個(gè)細(xì)胞我種過，遷移性極差，基本上就是不會(huì)動(dòng)。trypsin的時(shí)候拿到新孔里面。不用擔(dān)心

謝謝��！
那就是說，直接注入懸液就行嗎？

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9樓2010-12-25 06:56:06

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yusen_1982(金幣+1):歡迎討論！ 2010-12-26 21:38:22
westlover(金幣+2): 2010-12-28 10:27:25

引用回帖:

Originally posted by westlover at 2010-12-25 06:56:06:

謝謝�。�
那就是說，直接注入懸液就行嗎？

對，種的時(shí)候注意，細(xì)胞要吹打均勻，不可有粘在一起的，不可有沉底的。用pipe一滴一滴加下去。加到板上就不能再吹了。種幾個(gè)沒樣品的，看看效果咋樣，平行和重復(fù)次數(shù)要大于3次

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10樓2010-12-26 11:06:28

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謝謝大家?guī)兔Γ?

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11樓2010-12-28 10:30:00

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