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asdfghjkl-00

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[交流] 【求助/交流】求助DGGE的問題

我做了一次DGGE，條帶是有的，但是跑的不是開，請問是什么原因？有什么解決辦法？
電壓時(shí)60V ，時(shí)間是12h，梯度是30%-70%

[ Last edited by asdfghjkl-00 on 2011-1-11 at 09:58 ]

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1樓 2011-01-11 09:56:43

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在雨中

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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2):很有經(jīng)驗(yàn)啊~~~鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-01-12 10:29:31

引用回帖:

Originally posted by asdfghjkl-00 at 2011-01-12 09:13:13:

有的條帶已經(jīng)跑到下邊了，我怕再跑就出去了，所以想調(diào)整一下梯度，看是否可行？

你范了一個(gè)嚴(yán)重的概念錯(cuò)誤。如果梯度合適，電泳時(shí)間再長DNA也不會(huì)跑出去的，因?yàn)镈NA在它最合適的地方解鏈，遷移率非常低。
你的是不是細(xì)菌的DGGE？V3區(qū)的，這個(gè)梯度比較合適了。
真菌的話，大概20-50%的梯度。

你可以把你的上梯度弄大些，比如40-70%，但電泳時(shí)間要足夠。我做的話，一般100-120V，12h。效果很好。

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9樓2011-01-12 10:13:08

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rainwander

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dhd997(金幣+1):說的是啊 2011-01-12 10:02:57

先做個(gè)垂直電泳，摸索一下最適梯度吧

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2樓2011-01-11 10:38:17

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suoyi001

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dhd997(金幣+5):鼓勵(lì)新蟲交流 2011-01-11 14:08:53
asdfghjkl-00(金幣+1): 2011-01-12 09:15:35

梯度不夠啊，建議跑個(gè)梯度，跑的時(shí)間12h，有些長吧，我們都是4h�？纯磿�(huì)不會(huì)是染色時(shí)間不夠啊。

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3樓2011-01-11 13:43:25

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dhd997(金幣+1):鼓勵(lì)交流 2011-01-12 10:03:10

我如果是120V，才跑12h的，難道你的電泳時(shí)間不夠？很有可能！

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4樓2011-01-11 16:11:08

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