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飛奔吧珍寶豬

木蟲 (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】抑菌試驗(yàn)

感謝各位的熱心幫助，我還是希望能用常量肉湯稀釋法，不得已才換其他辦法（老板的堅(jiān)持，其實(shí)我也更贊同濾紙片法。但是老板也有他的想法)。希望能有更多的蟲友給我提建議，謝謝！

我是藥物分析方向的，對(duì)這方面不是很熟悉，特此請(qǐng)教O(∩_∩)O
   我們和天然藥物方向的一個(gè)實(shí)驗(yàn)室合作，他們負(fù)責(zé)用不同的有機(jī)溶劑去提取某中藥中的有效成分，而我們負(fù)責(zé)評(píng)價(jià)其抑菌效果。我們擬用常量營養(yǎng)肉湯稀釋法，即在液體培養(yǎng)基中加入不同濃度的提取物溶液，而后加入菌接種液，適宜條件下培養(yǎng)后，測(cè)定其QD值，用光密度來表征和計(jì)算抑菌率。
   問題就這樣產(chǎn)生了，由于是有機(jī)溶劑提取的，其水溶性必然很差，要想配制較高濃度的提取物水溶液不可實(shí)現(xiàn)（即使已經(jīng)使用了5%DMSO這樣的助溶手段）。因此有兩點(diǎn)設(shè)想：（1）直接將提取出的中藥有效部位不經(jīng)干燥，直接加入液體培養(yǎng)基中，但是常見有機(jī)溶劑如乙醇等，本身就有一定的抑菌效果，故需要做等量的純?nèi)軇┑目瞻讓?duì)照，然后扣除有機(jī)溶劑產(chǎn)生的那部分抑菌效果，但是兩者的抑菌效果具有加和性嗎？能這樣扣除嗎？（2）將提取物干燥，之后用5%DMSO助溶，并且用羥乙基纖維素等分散劑，形成均勻的類混懸體系，但如此操作的話，有效成分得不到很好的溶解，對(duì)抑菌效果有影響嗎？影響的程度大嗎？（細(xì)胞及藥物試驗(yàn)是經(jīng)常這樣實(shí)現(xiàn)的）
   希望有相關(guān)知識(shí)背景及經(jīng)驗(yàn)的蟲友們能給點(diǎn)建議及指導(dǎo)！不勝感激！

[ Last edited by 飛奔吧珍寶豬 on 2011-1-17 at 20:09 ]

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1樓 2011-01-17 16:28:46

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371147760

木蟲 (著名寫手)

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常量肉湯稀釋法

★ ★
飛奔吧珍寶豬(金幣+2): 2011-01-21 10:30:01
rainwander(金幣+2): 鼓勵(lì)交流~~ 2011-04-04 19:45:32

你提取的中藥有效成分的濃度高嗎，如果高的話你你直接用肉湯稀釋，如果稀釋的倍數(shù)高了那么溶劑（比如說乙醇）的作用就不用考慮了（因?yàn)橄♂屃撕芏啾叮�，如果有效成分的濃度低的話，可以做個(gè)對(duì)照也可以干燥后再稀釋。
本身用OD值判定結(jié)果很不準(zhǔn)確，你用常量稀釋法直接用眼觀察有沒細(xì)菌生長就可以判定結(jié)果吧，也可以用平板計(jì)數(shù)法判斷前后細(xì)菌數(shù)目的變化情況

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5樓2011-01-20 15:59:25

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蒙新2010

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飛奔吧珍寶豬(金幣+1): 2011-01-17 20:06:41

用OD值本身就不準(zhǔn)確啊，建議查看其他方法

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2樓2011-01-17 16:45:34

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天使托

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★
飛奔吧珍寶豬(金幣+1): 2011-01-17 20:06:45
rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)交流~~ 2011-04-04 19:45:10

其實(shí)你也可以混菌倒培養(yǎng)基，然后再給板子上點(diǎn)上濾紙片，再給濾紙片上點(diǎn)重要提取物，不過你得事先把中藥提取物完全溶解好！

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3樓2011-01-17 17:43:07

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srlee

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★ ★
amisking(金幣+2): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2011-01-17 19:32:39
飛奔吧珍寶豬(金幣+2): 謝謝。 2011-01-17 20:06:31

抑菌顯然不能用疊加計(jì)算的，建議用濾紙片法，可以用中藥粗提液浸潤濾紙片，將濾紙片烘干（讓有機(jī)溶劑揮發(fā)完）后，貼在已涂布好菌液的平板中，同時(shí)做一個(gè)相應(yīng)有機(jī)溶劑的對(duì)照！

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4樓2011-01-17 18:43:01

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