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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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30937747

木蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】酶切不出結(jié)果

我將一個(gè)質(zhì)粒熱轉(zhuǎn)至E.coli中擴(kuò)增后,用EcoRⅠ酶切鑒定正確.將鑒定正確的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至農(nóng)桿菌,在抗性平板上篩選擴(kuò)增后,提取出來(lái)的質(zhì)粒用EcoRⅠ再次鑒定,卻怎么也切不開(kāi),條帶從質(zhì)粒大小的那個(gè)地方開(kāi)始就開(kāi)始出現(xiàn)拖尾,一直拖到400bp(如果酶切正確,400bp是最小的一個(gè)片段).中間都看不到明顯的條帶.
請(qǐng)問(wèn)怎么解決

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1樓 2011-01-20 14:38:41

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380665135

新蟲(chóng) (初入文壇)

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30937747(金幣+3): 額.是的.所以我想知道是個(gè)什么修飾作用 2011-02-16 09:14:07
dhd997(金幣+1): 鼓勵(lì)交流 2011-02-16 10:44:47

可能是你的質(zhì)粒被農(nóng)桿菌修飾了吧

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9樓2011-02-15 20:06:20

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poog502

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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amisking(金幣+1): 鼓勵(lì)發(fā)帖交流！ 2011-01-20 19:40:59
30937747(金幣+1): 2011-01-20 20:20:44

1\農(nóng)桿菌的質(zhì)粒很少的，你這樣酶切看的見(jiàn)條帶嗎？
2、更換所用的器皿、水、buffer，之前也是切不開(kāi)，換個(gè)之后重新酶切就好了。

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2樓2011-01-20 14:55:05

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cdl007

木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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30937747(金幣+1): 2011-01-20 20:23:05

是不是酶切時(shí)間過(guò)久？可以嘗試一下37℃一個(gè)小時(shí)？

無(wú)圖無(wú)真相，
最好有三個(gè)孔，第一個(gè)酶單切，第二個(gè)酶單切，兩個(gè)酶雙切

理論上，前兩個(gè)泳道都是一條條帶，同樣大小，雙酶切的有兩條

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3樓2011-01-20 15:06:53

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30937747

木蟲(chóng) (小有名氣)

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...

引用回帖:

Originally posted by 30937747 at 2011-01-20 14:38:41:
我將一個(gè)質(zhì)粒熱轉(zhuǎn)至E.coli中擴(kuò)增后,用EcoRⅠ酶切鑒定正確.將鑒定正確的質(zhì)粒電轉(zhuǎn)至農(nóng)桿菌,在抗性平板上篩選擴(kuò)增后,提取出來(lái)的質(zhì)粒用EcoRⅠ再次鑒定,卻怎么也切不開(kāi),條帶從質(zhì)粒大小的那個(gè)地方開(kāi)始就開(kāi)始出現(xiàn)拖尾,一 ...

我想說(shuō).我是把一個(gè)質(zhì)粒轉(zhuǎn)到農(nóng)桿菌里面去了.再把我轉(zhuǎn)進(jìn)去的提出來(lái)

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4樓2011-01-20 20:21:30

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