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[交流]
【交流】用PBS緩沖液測(cè)試后碰到的問題
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大家好。 測(cè)量一種小分子的藥物。測(cè)試條件是Waters的儀器，用C18柱，內(nèi)徑4mm，自動(dòng)進(jìn)樣。 按照文獻(xiàn)報(bào)道，采用的流動(dòng)相 A：PBS(M=0.08M,pH=3), B：乙腈 A：B=65：35 在實(shí)驗(yàn)過程中遇到如下問題想請(qǐng)教下大家。 1. 配置PBS緩沖液后，用孔徑0.45的PALL濾紙?jiān)谏靶韭┒飞蠝p壓過濾過濾。因?yàn)橄冗^濾的純水，沒什么問題。接著過濾PBS緩沖液的時(shí)候，流速特別慢，幾乎是到了每秒才一滴，影響了實(shí)驗(yàn)的速度。經(jīng)檢測(cè)，不是漏斗的問題，因?yàn)橄惹斑^濾水的時(shí)候沒問題；濾紙拿下，直接用砂芯漏斗抽濾純水也沒問題。于是懷疑是濾紙有問題。我每次都是用同一張濾紙先過濾純水，再濾PBS。想問下大家，用0.45的濾紙過濾PBS為什么會(huì)那么慢呢? 會(huì)堵塞濾紙嗎？ 2.看到大家議論說(shuō)，PBS緩沖液的濃度不能太大。我采用文獻(xiàn)中的0.08M，與乙腈的比為 65：35，沒有發(fā)現(xiàn)柱子被堵。請(qǐng)問這樣子是不是很冒險(xiǎn)啊。還是把濃度降低到0.01M比較保險(xiǎn)？ 3. 測(cè)試前，要將準(zhǔn)備走PBS的通道先用純水沖先沖洗30min是嗎？比如我準(zhǔn)備用A：PBS，B：乙腈，實(shí)驗(yàn)開始的時(shí)候先用乙腈穩(wěn)定儀器30min,一般都是再直接用和實(shí)驗(yàn)條件一樣的流動(dòng)相配比平衡柱子1h。此次實(shí)驗(yàn)中因?yàn)橛蠵BS，是不是再應(yīng)該用純水沖洗B通道沖洗30min 呢？如果是，那么此時(shí)的沖洗條件該怎么設(shè)置，乙腈和水的比例為多少比較合適呢？ 4. 實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，也需要用純水沖洗色譜柱。我直接將通PBS的通道換成純水，然后用水：乙腈=95：5沖洗30min， 再用乙腈沖洗30min。最后將色譜柱保存在純乙腈中，這樣是否合理？ 5.兩天兩次相同條件的實(shí)驗(yàn)，我就測(cè)一個(gè)純的HPLC級(jí)的物質(zhì)，出峰時(shí)間由7.2min推遲到8.2min左右。這會(huì)是哪些原因引起的呢？我實(shí)驗(yàn)的溫度是儀器恒溫30度。 謝謝大家！ |
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9樓2011-02-16 08:44:12
2樓2011-02-13 14:38:41
mrzouhao
木蟲之王 (文壇精英)
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3樓2011-02-13 21:05:20
xuzhexins0
禁蟲 (小有名氣)
nancy1984(金幣+1): 想多聽聽這里高人的一間嘛~ 2011-02-14 08:40:29
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4樓2011-02-13 21:40:52
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