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henghuibio新蟲 (小有名氣)
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[交流]
【分享】怎樣處理、保存離子交換填料 已有1人參與
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離子交換填料的處理和保存 離子交換填料使用前一般要進(jìn)行處理。干粉狀的離子交換填料首先要進(jìn)行膨化，將干粉在水中充分溶脹，以使離子交換填料顆粒的孔隙增大，具有交換活性的電荷基團(tuán)充分暴露出來。而后用水懸浮去除雜質(zhì)和細(xì)小顆粒。再用酸堿分別浸泡，每一種試劑處理后要用水洗至中性，再用另一種試劑處理，最后再用水洗至中性，這是為了進(jìn)一步去除雜質(zhì)，并使離子交換填料帶上需要的平衡離子。市售的離子交換填料中通常陽離子交換填料為Na 型(即平衡離子是Na 離子)，陰離子交換填料為Cl 型，因為通常這樣比較穩(wěn)定。處理時一般陽離子交換填料最后用堿處理，陰離子交換填料最后用酸處理。常用的酸是HCl，堿是NaOH 或再加一定的NaCl，這樣處理后陽離子交換填料為Na 型，陰離子交換填料為Cl 型。使用的酸堿濃度一般小于0.5mol/L，浸泡時間一般30min。處理時應(yīng)注意酸堿濃度不宜過高、處理時間不宜過長、溫度不宜過高，以免離子交換填料被破壞。另外要注意的是離子交換填料使用前要排除氣泡，否則會影響分離效果。 離子交換填料的再生是指對使用過的離子交換填料進(jìn)行處理，使其恢復(fù)原來性狀的過程。前面介紹的酸堿交替浸泡的處理方法就可以使離子交換填料再生。離子交換填料的轉(zhuǎn)型是指離子交換填料由一種平衡離子轉(zhuǎn)為另一種平衡離子的過程。如對陰離子交換填料用HCl 處理可將其轉(zhuǎn)為Cl 型，用NaOH 處理可轉(zhuǎn)為OH 型，用甲酸鈉處理可轉(zhuǎn)為甲酸型等等。對離子交換填料的處理、再生和轉(zhuǎn)型的目的是一致的，都是為了使離子交換填料帶上所需的平衡離子。 離子交換層析主要通過離子交換填料上的平衡離子與樣品中的組分離子進(jìn)行可逆的交換而實現(xiàn)分離的目的，因此在離子交換層析前要注意使離子交換填料帶上合適的平衡離子，使平衡離子能與樣品中的組分離子進(jìn)行有效的交換。如果平衡離子與離子交換填料結(jié)合力過強(qiáng)，會造成組分離子難以與交換劑結(jié)合而使交換容量降低。另外還要保證平衡離子不對樣品組分有明顯影響。因為在分離過程中，平衡離子被置換到流動相中，它不能對樣品組分有污染或破壞。如在制備過程中用到的離子交換填料的平衡離子是H 或OH 離子，因為其它離子都會對純水有污染。但是在分離蛋白質(zhì)時，一般不能使用H 或OH 型離子交換填料，因為分離過程中H 或OH 離子被置換出來都會改變層析柱內(nèi)pH 值，影響分離效果，甚至引起蛋白質(zhì)的變性。離子交換填料保存時應(yīng)首先處理洗凈蛋白等雜質(zhì)，并加入適當(dāng)?shù)姆栏瘎话慵尤?.02 %的疊氮鈉，4°C 下保存。 上述材料供參考。具體填料的處理方法，請依據(jù)其使用說明。  [ Last edited by henghuibio on 2011-2-15 at 10:37 ] |
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2樓2013-11-26 22:35:17
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