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[交流] 【求助/交流】293T細(xì)胞里面有小顆粒，細(xì)胞不貼壁，無法繼續(xù)培養(yǎng)

我培養(yǎng)的293T細(xì)胞開始一直長的好好的，后來就出現(xiàn)很多小顆粒，像是細(xì)胞碎片一樣的東西，第一次加大抗生素的量就救回來了，但是后來又出現(xiàn)了這樣的情況，再養(yǎng)也養(yǎng)不活了，又拿了一支復(fù)蘇，還是這樣的情況，上個(gè)圖，請(qǐng)各位給想想辦法!

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1樓 2011-02-18 10:38:44

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wuw579

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這張圖片不清晰看不出細(xì)胞和碎片又或者是你的超凈臺(tái)培養(yǎng)箱要定期消毒滅菌別人的細(xì)胞也有你這樣的問題嗎

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2樓2011-02-18 13:27:32

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Originally posted by wuw579 at 2011-02-18 13:27:32:
這張圖片不清晰看不出細(xì)胞和碎片又或者是你的超凈臺(tái)培養(yǎng)箱要定期消毒滅菌別人的細(xì)胞也有你這樣的問題嗎

我們的超凈臺(tái)培養(yǎng)箱都是定期消毒的，圖片上基本上都是碎片，那兩個(gè)圓形的是細(xì)胞，但是沒有貼壁，現(xiàn)在復(fù)蘇的細(xì)胞都是飄著的，貼壁的都是些碎片，沒有正常的細(xì)胞形態(tài)，我們一個(gè)培養(yǎng)箱里還養(yǎng)了PK15，形態(tài)很正常

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3樓2011-02-18 13:34:56

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zhgqn

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rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-02-19 11:14:36

看著細(xì)胞像是凋亡了。應(yīng)該是凍存的條件不合適或者復(fù)蘇以后的培養(yǎng)條件不好。如果用抗生素能就回來，還有可能是污染了。。。如果碎片不停地動(dòng)，培養(yǎng)基顏色變黃就是污染了。

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4樓2011-02-18 16:52:05

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三磷酸腺苷

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rainwander(金幣+1): 鼓勵(lì)積極參與交流~~~ 2011-02-19 11:14:40

支原體污染
扔掉重新復(fù)蘇

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5樓2011-02-18 17:02:53

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也許是你在凍存的時(shí)候細(xì)胞狀態(tài)不好又或者凍存時(shí)胰酶消化時(shí)間過長

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6樓2011-02-18 19:17:53

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_落落_

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lstt09nk(金幣+2): 鼓勵(lì)分享個(gè)人經(jīng)驗(yàn) 2011-02-18 20:47:38

我也碰到類似情況，不知道樓主用的什么牌子的小牛血清，如果是四季青的建議樓主換GIBCO的，養(yǎng)細(xì)胞之前先把培養(yǎng)箱全部清理下，具體什么污染可以上網(wǎng)查下黑膠蟲。

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8樓2011-02-18 20:01:41

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microrex

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可能是黑膠蟲

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9樓2011-02-19 11:04:41

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Originally posted by _落落_ at 2011-02-18 12:01:41:
我也碰到類似情況，不知道樓主用的什么牌子的小牛血清，如果是四季青的建議樓主換GIBCO的，養(yǎng)細(xì)胞之前先把培養(yǎng)箱全部清理下，具體什么污染可以上網(wǎng)查下黑膠蟲。

我用的血清是GIBCO的，以前用四季青的血清反而還好些，因?yàn)榧?xì)胞是從別的實(shí)驗(yàn)室要的，所以凍存的情況我不是很了解，碎片是不會(huì)動(dòng)的，培養(yǎng)基顏色也沒有變，所以推斷應(yīng)該不是污染，我把培養(yǎng)基也取了一部分一起培養(yǎng)，沒有出現(xiàn)變渾濁的情況，我想也是細(xì)胞凋亡了，主要是細(xì)胞不貼壁這個(gè)問題很關(guān)鍵，以前我是傳著傳著細(xì)胞就不貼了，然后就出現(xiàn)這種情況。現(xiàn)在我自己沒有細(xì)胞，所以沒有條件一次一次的復(fù)蘇，問題沒找出來之前不敢再養(yǎng)了。

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10樓2011-02-19 11:13:18

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Originally posted by zhgqn at 2011-02-18 08:52:05:
看著細(xì)胞像是凋亡了。應(yīng)該是凍存的條件不合適或者復(fù)蘇以后的培養(yǎng)條件不好。如果用抗生素能就回來，還有可能是污染了。。。如果碎片不停地動(dòng)，培養(yǎng)基顏色變黃就是污染了。

以前出現(xiàn)過一次，說是革蘭氏陰性菌污染，我用抗生素是救回來了的，但是這次情況應(yīng)該不一樣，加了抗生素也沒有什么反應(yīng)

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11樓2011-02-19 11:15:40

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薇sherry(金幣+10): 別人實(shí)驗(yàn)室都沒有養(yǎng)了，這是最郁悶的，還是謝謝 2011-02-22 14:34:16

從細(xì)胞源頭處要一瓶正在養(yǎng)的細(xì)胞，再要來一點(diǎn)他們的培養(yǎng)基繼續(xù)養(yǎng)，如果還出現(xiàn)此狀況就是你們實(shí)驗(yàn)室環(huán)境的問題，如果生長良好再換你們實(shí)驗(yàn)室的小牛血清和培養(yǎng)基，看看是不是這兩個(gè)出什么問題，如果都沒問題那就是凍存出現(xiàn)的問題，還可以問問他們實(shí)驗(yàn)室復(fù)蘇出現(xiàn)這種情況沒，一點(diǎn)點(diǎn)排除可能的影響因素就找到原因了。

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12樓2011-02-20 10:04:42

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jora0418

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小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

圖片給的不清楚��？是不是細(xì)胞碎片？

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13樓2015-12-03 18:30:32

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簡單回復(fù)

zyxme7樓

2011-02-18 19:31 回復(fù)

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