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Louie.F銅蟲 (初入文壇)
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[交流]
【求助/交流】網(wǎng)上盛傳的 冷酒精沉淀法抗體純化 是否真能用？？？？？？？？？？
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本人欲采取一種簡(jiǎn)單的方法提取免疫球蛋白，由于一些原因不能采用辛酸-硫酸銨沉淀法，在網(wǎng)上查得冷酒精沉淀法，經(jīng)簡(jiǎn)單試提，所得抗體濁度極大，很是懷疑這種方法能否可行 下面是網(wǎng)上的方法http://www.biomart.cn/experiment/430/502/503/507/17893.htm 1、 血清加3倍體積的蒸餾水，調(diào)節(jié) pH至7.7(±)冷卻到0℃。在激烈攪拌的條件下，加預(yù)冷的酒精（-20℃）到最終濃度為20%，保持在-5℃。產(chǎn)生的沉淀（a），含有大多數(shù)種類的免疫球蛋白。 2、 沉淀a懸浮于25倍體積的0.15～20mol/l NaCl溶液（冷）中，加有0.05mol/l醋酸調(diào)節(jié) pH到5.1，產(chǎn)生的沉淀（b），包括大部分的IgA和IgM，IgG留在上清液內(nèi)。 3、調(diào)節(jié) 上清液的pH到7.4，加冷酒精（-20℃～-30℃）到最終濃度為25%，維持在-5℃。所得到的沉淀（c）含有90%～98% IgG。不同動(dòng)物，IgG分離的條件和產(chǎn)量略有不同。見下表。 4、從沉淀（b）可按下述方法進(jìn)一步分離出IgA和IgM的混合物：將沉淀（b）懸浮在0℃ 水中，調(diào)節(jié) pH到5.1，離心去除不溶的蛋白。調(diào)節(jié) 上清液離子強(qiáng)度到0.01～0.0075,pH5.5。然后加冷酒精到最終濃度為10%，保持在 –2℃或-3℃低溫，所得的沉淀（b-b）主要含IgA和IgM。 本人也知道，網(wǎng)上的東西多半不靠譜，若是有種方法提取經(jīng)驗(yàn)的人，希望給予一點(diǎn)提示 |
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