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wwling
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[交流]
【求助/交流】請(qǐng)教下巢式PCR與二次PCR的區(qū)別 已有12人參與
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最近糾結(jié)于這個(gè)問題，具體的是因?yàn)椴惶彩絇CR，是不是只要有兩對(duì)引物就可以呢？看網(wǎng)上說的是直接拿第一輪PCR產(chǎn)物為模板做第二輪擴(kuò)增，想問的是為什么不直接用第二輪的引物擴(kuò)增，得到的產(chǎn)物做模板繼續(xù)用第二輪引物擴(kuò)增（即二次PCR）？ 望蟲子們指導(dǎo)下~~ |
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brightfuture01
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dhd997(金幣+6): good 2011-02-23 09:40:00
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dhd997(金幣+6): good 2011-02-23 09:40:00
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巢式PCR雖然也是擴(kuò)增兩次，但是跟二次PCR相比，它的優(yōu)勢(shì)是多方面的。 巢式PCR的兩對(duì)引物是嵌套的，即第二對(duì)引物是在第一對(duì)引物往里的。 這點(diǎn)區(qū)別產(chǎn)生的優(yōu)點(diǎn)很多：能夠提高檢測(cè)的特異性，在巢式過程中往往第一輪的PCR 產(chǎn)物跑電泳啥都看不到，但是經(jīng)過第二輪的PCR，產(chǎn)物就很亮了。這點(diǎn)我深有體會(huì)， 曾經(jīng)試驗(yàn)室里一個(gè)兄弟幫別人檢測(cè)黃瓜根際真菌，只要一個(gè)孢子，液氮碾磨，做巢式 就能檢測(cè)出來。 這個(gè)優(yōu)點(diǎn)是二次PCR所不能媲美的。 另外還有一點(diǎn)就是從酶的角度分析，你從3kb的片段上擴(kuò)1kb的序列的效率要比1kb設(shè) 計(jì)引物擴(kuò)增自身高的多得多。聚合酶起作用的時(shí)候同樣需要擴(kuò)增起始位點(diǎn)的上游有一 段序列，方便結(jié)合。所以說，巢式PCR在檢測(cè)中的檢測(cè)限要比二次PCR低的低得多，要 更加靈敏。尤其是樣品中目的序列的豐度較低的情況下，巢式PCR的優(yōu)勢(shì)就展現(xiàn)出來了。 |
4樓2011-02-22 18:40:33
abc5710110
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dhd997(金幣+2): good 2011-02-22 18:39:29
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dhd997(金幣+2): good 2011-02-22 18:39:29
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在百度百科上找到些關(guān)于巣式PCR的信息，與普通PCR相比，優(yōu)點(diǎn)主要的提高了特異性，有效的減少了錯(cuò)配影響。 http://baike.baidu.com/view/688277.htm |
2樓2011-02-22 18:33:17
3樓2011-02-22 18:37:23
susizheng
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5樓2011-02-22 20:04:12
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