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wangyan1986626銅蟲 (小有名氣)
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[交流]
【求助/交流】包涵體求助！ 已有2人參與
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包涵體是不是就是重組基因表達(dá)的蛋白質(zhì)，因?yàn)槿鄙僬郫B啥的，與大腸桿菌表達(dá)的胰島素有啥區(qū)別呢， 我剛剛接觸到包涵體，所以提的問(wèn)題請(qǐng)大家不要見(jiàn)笑��！ |
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2樓2011-02-25 12:32:57
lxj341401
至尊木蟲 (著名寫手)
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
rainwander(金幣+2): 2011-02-25 18:06:27
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rainwander(金幣+2): 2011-02-25 18:06:27
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包涵體是指工程菌表達(dá)的蛋白在細(xì)胞內(nèi)凝集，形成無(wú)活性的固體顆粒。一般含有50%以上的重組蛋白，其余為核糖體元件、RNA聚合酶、外膜蛋白o(hù)mpC、ompF和ompA等，環(huán)狀或缺口的質(zhì)粒DNA，以及脂體、脂多糖等，大小為0.5-1um，難溶與水，只溶于變性劑如尿素、鹽酸胍等。 包涵體的形成主要因?yàn)樵谥亟M蛋白的表達(dá)過(guò)程中缺乏某些蛋白質(zhì)折疊的輔助因子，或環(huán)境不適，無(wú)法形成正確的次級(jí)鍵等原因形成的。 1、表達(dá)量過(guò)高，研究發(fā)現(xiàn)在低表達(dá)時(shí)很少形成包涵體，表達(dá)量越高越容易形成包涵體。原因可能是合成速度太快，以至于沒(méi)有足夠的時(shí)間進(jìn)行折疊，二硫鍵不能正確的配對(duì)，過(guò)多的蛋白間的非特異性結(jié)合，蛋白質(zhì)無(wú)法達(dá)到足夠的溶解度等。 2、重組蛋白的氨基酸組成：一般說(shuō)含硫氨基酸越多越易形成包涵體，而脯氨酸的含量明顯與包涵體的形成呈正相關(guān)。 3、重組蛋白所處的環(huán)境：發(fā)酵溫度高或胞內(nèi)pH接近蛋白的等電點(diǎn)時(shí)容易形成包涵體。 4、重組蛋白是大腸桿菌的異源蛋白，由于缺乏真核生物中翻譯后修飾所需酶類，致使中間體大量積累，容易形成包涵體沉淀。因此有人采用共表達(dá)分子伴侶的方法以增加可溶蛋白的比例。 |
3樓2011-02-25 17:51:55
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