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[交流]
【求助/交流】血細胞計數(shù)板計數(shù)與流式相差一倍，怎么解決？
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細胞計數(shù)過程 1.蓋好蓋玻片：取一套血球計數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計數(shù)槽上。 2.制備計數(shù)用的細胞懸液：用移液器吸100μL細胞懸液到一離心管中，加入100μL PBS進行稀釋。 3.將細胞懸液滴入計數(shù)板：將待測細胞懸液吹均勻，然后吸取10μL懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，蓋片下充滿懸液。 4.統(tǒng)計四個大格的細胞數(shù)：數(shù)出四角的四個大格（每個大格含有16個中格）中的細胞數(shù)目。一般我計數(shù)時每個大格里有50個細胞。 5.計算原細胞懸液的細胞數(shù)L：按照下面公式計算細胞密度： （細胞懸液的細胞數(shù)）/ml＝（四個大格子細胞數(shù)/4)×2×104 說明：公式中除以4因為計數(shù)了4個大格的細胞數(shù)。公式中乘以2因為細胞懸液稀釋一倍。 流式計數(shù) 細胞計數(shù)板計完數(shù)后取一定量的細胞（如500萬個），經(jīng)過幾次離心重懸后上流式計數(shù)。離心速度為1000rpm/min，離心4min，轉(zhuǎn)子為水平轉(zhuǎn)子。而跑完流式只計到200萬到300萬個細胞。 不知中間出現(xiàn)什么錯誤導致這種結(jié)果，還望各位指點！ |
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差一半很正常啊. 血細胞計數(shù)板本來就是個不可以精確定量的，一般定下數(shù)量級就差不多了。 你同一個樣本，同樣的方式稀釋操作，計數(shù)，數(shù)出來的都很大差別。而且這個跟不同的人操作，不同的手法都有關(guān)系，不能較真。不信的話一個樣本稀釋兩次數(shù)數(shù)看，反正我稀釋兩次數(shù)，沒有一次是一樣的。差一半什么的都是很常見 流式細胞儀的話，它是一個一個數(shù)的，雖然圈出去的碎片里可能也有細胞，而且圈細胞的時候也不是那么的精確，但是相對來說，還是比較精確的。 OVER |
5樓2011-03-07 11:40:50
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4樓2011-03-07 11:34:36
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