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WAX2010

銀蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 【求助/交流】血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)與流式相差一倍，怎么解決？

細(xì)胞計(jì)數(shù)過(guò)程

1.蓋好蓋玻片：取一套血球計(jì)數(shù)板，將特制的蓋玻片蓋在血球計(jì)數(shù)槽上。

2.制備計(jì)數(shù)用的細(xì)胞懸液：用移液器吸100μL細(xì)胞懸液到一離心管中，加入100μL PBS進(jìn)行稀釋。

3.將細(xì)胞懸液滴入計(jì)數(shù)板：將待測(cè)細(xì)胞懸液吹均勻，然后吸取10μL懸液沿蓋片邊緣緩緩滴入，蓋片下充滿懸液。

4.統(tǒng)計(jì)四個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)：數(shù)出四角的四個(gè)大格（每個(gè)大格含有16個(gè)中格）中的細(xì)胞數(shù)目。一般我計(jì)數(shù)時(shí)每個(gè)大格里有50個(gè)細(xì)胞。

5.計(jì)算原細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)L：按照下面公式計(jì)算細(xì)胞密度：

（細(xì)胞懸液的細(xì)胞數(shù)）/ml＝（四個(gè)大格子細(xì)胞數(shù)/4)×2×104

說(shuō)明：公式中除以4因?yàn)橛?jì)數(shù)了4個(gè)大格的細(xì)胞數(shù)。公式中乘以2因?yàn)榧?xì)胞懸液稀釋一倍。

流式計(jì)數(shù)

細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)完數(shù)后取一定量的細(xì)胞（如500萬(wàn)個(gè)），經(jīng)過(guò)幾次離心重懸后上流式計(jì)數(shù)。離心速度為1000rpm/min，離心4min，轉(zhuǎn)子為水平轉(zhuǎn)子。而跑完流式只計(jì)到200萬(wàn)到300萬(wàn)個(gè)細(xì)胞。

不知中間出現(xiàn)什么錯(cuò)誤導(dǎo)致這種結(jié)果，還望各位指點(diǎn)！

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1樓 2011-03-07 10:58:13

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Chlo_Q

木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)

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Originally posted by WAX2010 at 2011-05-05 16:39:24:
如果每次誤差都一致的話，可能生長(zhǎng)曲線趨勢(shì)應(yīng)該差不多吧！

嗯，我后來(lái)用計(jì)數(shù)法做了生長(zhǎng)曲線了，做出來(lái)挺好的
就是記數(shù)的時(shí)候太累了眼睛
另一點(diǎn)，取樣時(shí)，最好分別取兩次，讀四個(gè)大格只能保證消除分散時(shí)的誤差
取樣的誤差必須通過(guò)多數(shù)取樣來(lái)檢驗(yàn)
我設(shè)了三個(gè)復(fù)孔，每個(gè)復(fù)孔還要計(jì)兩次，最后取6個(gè)值的平均值

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9樓2011-05-05 20:13:11

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三磷酸腺苷

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WAX2010(金幣+6): 2011-03-15 08:48:34

把碎片也數(shù)進(jìn)去了吧
流式的話，圈掉碎片就沒(méi)那么多了

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2樓2011-03-07 11:15:01

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-07 11:15:01:
把碎片也數(shù)進(jìn)去了吧
流式的話，圈掉碎片就沒(méi)那么多了

沒(méi)有啊，懸液中細(xì)胞碎片很少的。

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3樓2011-03-07 11:19:19

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三磷酸腺苷

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引用回帖:

Originally posted by WAX2010 at 2011-03-07 11:19:19:
沒(méi)有啊，懸液中細(xì)胞碎片很少的。

那就是離心神馬的損失或者損失細(xì)胞到時(shí)候流式結(jié)果就少了
而且計(jì)數(shù)的時(shí)候主觀性也強(qiáng)一點(diǎn)
各種因素導(dǎo)致偏差
這個(gè)還算好的啦，差不到半個(gè)數(shù)量級(jí)

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4樓2011-03-07 11:34:36

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