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寒蕤

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[交流] 【求助/交流】求助免疫共沉淀實(shí)驗(yàn) 已有8人參與

各位好！小妹最近在做免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)，但是幾輪下來(lái)沒(méi)有得到結(jié)果。我用的是10cm的皿，加入500ul-600ul裂解液，protein G beads的量為40ul，一抗為1.5ug。
抗體先和上清裂解液4度孵育過(guò)夜，然后又加beads4度孵育4h。最后用裂解液洗三次。做了western后可以檢測(cè)到目的蛋白，但是沒(méi)有檢測(cè)到相互作用蛋白。希望大家給點(diǎn)建議。謝謝！

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1樓 2011-03-07 14:57:56

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wyyun3025

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我正準(zhǔn)備做免疫沉淀

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8樓2011-03-07 20:09:12

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三磷酸腺苷

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但是沒(méi)有檢測(cè)到相互作用蛋白

說(shuō)不定就沒(méi)有發(fā)生相互作用……

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3樓2011-03-07 17:08:08

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寒蕤

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Originally posted by jurkat.1640 at 2011-03-07 17:05:38:
可能細(xì)胞量不夠

10cm皿的細(xì)胞不夠嗎？

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4樓2011-03-07 17:24:34

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Originally posted by 三磷酸腺苷 at 2011-03-07 17:08:08:
但是沒(méi)有檢測(cè)到相互作用蛋白

說(shuō)不定就沒(méi)有發(fā)生相互作用……

但是之前實(shí)驗(yàn)室的師兄通過(guò)串聯(lián)親和純化（TAP）的方法吊到了與目的蛋白相互作用的蛋白了，現(xiàn)在導(dǎo)師就是讓我要CoIP做出來(lái)。但是不知道為什么，CoIP就出不來(lái)了？現(xiàn)在希望大家可以指點(diǎn)一下。謝謝了！

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5樓2011-03-07 17:28:11

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