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【求助/交流】哪位大師給我講講，先大謝啦！ 已有2人參與
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| 果膠脂酶和果膠裂解酶的酶活如何讓測定，方法和原理是什么？哪位大師給我講講，先大謝啦 |
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starseacow
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖交流
看天(金幣+2): guood 2011-03-27 09:16:07
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網(wǎng)上找的，分享給你 實驗三 蕃茄中果膠酶活力的測定 一、原理： 蕃茄中的果膠酶系相當(dāng)復(fù)雜，它主要包括聚半乳糖醛酸酶（PG）和果膠脂酶（PE）兩類。聚半乳糖醛酸酶能催化果膠降解，導(dǎo)致果膠溶液粘度下降。因此，通過測定酶催化反應(yīng)體系粘度下降的速度能測定它的活力，果膠脂酶能催化果膠分子中半乳糖醛酸單位上的酯鍵水解產(chǎn)生游離的羧基和甲醇，導(dǎo)致果膠溶液的pH下降，因此可以用pH—stat方法測定它的活力。 二、試劑： 1． 20%氯化鈉溶液 2．0.05mol/L的醋酸—醋酸鈉緩沖溶液pH4.5（Ⅰ） 3.1%果膠溶液pH 4.5 4. 0.5mol/L的醋酸—醋酸鈉緩沖溶液pH4.5（Ⅱ） 5．1mol/L氯化鈉溶液 6．0.1mol/L氫氧化鈉溶液（準(zhǔn)確標(biāo)定） 7．0.05mol/L 氫氧化鈉溶液 三、步驟： 1．酶液的制備 300g蕃茄+100mL20%氯化鈉溶液→均漿→離心（3000rpm 15min）→上層清液→抽濾→離心〔80%（NH4）2SO4飽和度〕→沉淀（溶于0.05mol/L醋酸——醋酸鈉緩沖液<10mL）→酶液在0.05mol/L醋酸——醋酸鈉緩沖液中透析→透析物→離心→部分純化的果膠酶溶液 2．PG活力測定 50ml1%果膠+20ml0.5mol/L醋酸——醋酸鈉緩沖液+30ml去離子水 ↓ 混勻于250ml具塞三角瓶，攪拌15min ↓ 轉(zhuǎn)移20ml于50ml三角瓶中 部分純化酶液 ↘ ↓ ↙ 粘度計 ↙ 30度恒溫水浴平衡↘ 吸1ml去離子水于果膠溶液中 吸1ml酶液于果膠溶液中，計時 ↓ 10ml反應(yīng)液于恒溫好的粘度中 ↙ ↘ 果膠空白實驗 在不同時間間隔連續(xù) 記錄體系流動時間測3次 測定體系流動間 注：以流動時間對測定時間作圖，并外推求出零點。從直線的斜率計算流動時間降低的速度，以每秒流動時間降低的百分?jǐn)?shù)表示果膠酶的活力。 3．PE活力測定。 10ml1%果膠+2 .5ml1M的NaCl+10ml去離子水（于50ml酶反應(yīng)器中，恒溫30℃） ↓ 0.1MNaOH調(diào)PH7.5 ↓ 加5ml酶液（pH7.5），立即用0.1MNaOH調(diào)PH7.5，計時 ↓ 0.05MNaOH調(diào)PH7.3——7.8 ↓ 測定不同時間堿液消耗量（累積量）。30 ℃，40 ℃各做一次。 注：作NaOH消耗量——反應(yīng)時間圖，從直線斜率計算酶的活力。每分鐘釋放出一個微克當(dāng)量羥基定義為一個果膠酯酶的活力單位。 |
2樓2011-03-19 23:06:45
3樓2011-03-26 23:18:48
starseacow
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4樓2011-03-27 12:14:33
5樓2011-03-28 23:02:51
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