xupeixian

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[交流] 【求助/交流】超薄切片中，植物亞細胞中的重金屬固定問題

打算做透射電子顯微鏡（TEM），觀察植物亞細胞中重金屬鎘（Cd）的分布狀態(tài)，看了一些相關文獻，有以下幾點困惑，希望得到大家的幫助：
1.Cd在植物亞細胞中會不會滲出？
2.文獻講用Na2S固定，這種方法可靠嗎？
3.植物中已經存在重金屬了，做TEM時還要再用檸檬酸鉛之類的染色嗎？
4.有誰實驗室比較擅長做這方面的？
懇請幫助。

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1樓 2011-03-30 11:00:11

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Liz.Li

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★
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引用回帖:

2樓: Originally posted by champion555 at 2011-04-05 07:48:13
小蟲做TEM，提供些參考意見，講的不對的還請指教：
1、Cd在植物亞細胞中會不會滲出。植物組織是切成1~3mm³的小塊，在進行超薄切片的時候還要修包埋塊，一般都是看塊中間的，lz只要在取樣的時候小心些就是，不 ...

請問做植物材料的透射電鏡觀察對電鏡型號有要求嗎？您用的是什么型號的透射電鏡呢？
我們學校的透射電鏡是日本電子JEM-2100，但是負責的老師跟我說他們都做無機材料的，植物材料怕是不能看……

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7樓2014-01-05 10:58:05

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champion555

新蟲

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★
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xupeixian(金幣+10): 2011-04-06 17:22:28

小蟲做TEM，提供些參考意見，講的不對的還請指教：
1、Cd在植物亞細胞中會不會滲出。植物組織是切成1~3mm³的小塊，在進行超薄切片的時候還要修包埋塊，一般都是看塊中間的，lz只要在取樣的時候小心些就是，不要切到感興趣的部位。

2、Na2S固定我沒用過。植物組織固定分前固定和后固定，前固定都是用2.5%的戊二醛，后固定用1%鋨酸。當然也有其他的一些多重固定方法，視樣品材料而定，lz可以去搜一下，很多的。

3、植物TEM必須要用檸檬酸鉛和醋酸雙氧鈾雙重的染色的，因為超薄切片太薄，在電鏡下的反差弱，需要染色來加強反差。

祝lz實驗成功！

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2樓2011-04-05 07:48:13

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xupeixian

實習版主

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首先，我要謝謝你，等待了這么多天，終于有回復的了。
Na2S固定，主要是在戊二醛固定后，來使Cd離子沉淀用的，生成CdS顆粒，在TEM中就會觀察到黑色顆粒。但是這種方法是否可靠，不得而知。因為餓酸后固定后，細胞中的脂肪粒等等會形成黑色的顆粒嗎？到底哪些黑色顆粒是重金屬呢？這個有點疑問。

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3樓2011-04-06 17:28:20

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champion555

新蟲

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★
xupeixian(金幣+5):謝謝參與

引用回帖:

Originally posted by xupeixian at 2011-04-06 17:28:20:
首先，我要謝謝你，等待了這么多天，終于有回復的了。
Na2S固定，主要是在戊二醛固定后，來使Cd離子沉淀用的，生成CdS顆粒，在TEM中就會觀察到黑色顆粒。但是這種方法是否可靠，不得而知。因為餓酸后固定后 ...

呵呵，最近沒怎么上小木蟲，所以到現在才看到。

你可以試一試這個方法。切片中的黑色顆粒是肯定存在的。我建議CdS顆粒在片子上的粒徑大小要搞清楚，這樣即使片子上有些污染了也可以根據CdS的粒徑來分析。
還有就是鈾-鉛染色的時候要小心一點，不能有鉛污染。

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4樓2011-04-07 11:43:24

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