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xiaotan1952鐵蟲 (初入文壇)
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[交流]
【原創(chuàng)】關(guān)于P65檢測的問題，歡迎大家指教、討論 已有2人參與
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本人正在做某一目的基因與其下游NF-KB活性的實(shí)驗(yàn)（非刺激狀態(tài)下） 該目的基因可能參與了ikb-a的降解，即預(yù)期的實(shí)驗(yàn)效果為沉默該基因后包漿ikb-a含量（WB）上調(diào)，p65核內(nèi)轉(zhuǎn)位減少（WB），DNA結(jié)合能力下調(diào)（EMSA) 目前我所考慮的ikb-a的WB即用總蛋白（或提包漿蛋白） 但是關(guān)于p65我有些疑問，到底僅只需提取核內(nèi)蛋白做p65的WB（普通p65抗體）即能反映p65核內(nèi)轉(zhuǎn)位表達(dá)的變化，還是需要加做總蛋白p65（即核內(nèi)p65/總p65的比值）來反映p65核內(nèi)轉(zhuǎn)位表達(dá)的變化呢？ 思考這個(gè)問題已經(jīng)不短時(shí)間了，在各大園子里也關(guān)注過大家的討論，也看了一點(diǎn)點(diǎn)文獻(xiàn)，但是一直沒有明確這樣一個(gè)問題 特請各位指教、討論，謝謝！ |
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xiaotan1952
鐵蟲 (初入文壇)
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- 專業(yè): 消化系統(tǒng)腫瘤
2樓2011-04-04 22:59:54
定點(diǎn)突變酶切之后出問題，請教高手~~~~�。�！
★ ★ ★ ★
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3): 歡迎交流 2011-04-07 11:27:27
小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
dhd997(金幣+3): 歡迎交流 2011-04-07 11:27:27
| 我剛開始做定點(diǎn)突變，在PCR擴(kuò)增之后出來的電泳條帶是正確的，4000多bp，但是用 DpnI酶切之后的到得電泳條帶就出問題了，居然跑到1000bp多去了。問了師姐，他說的得到的條帶應(yīng)該跟原來的差不多才對，我重復(fù)做了兩三次，得到的結(jié)果都是一樣的。其中有一次還做了個(gè)對照組，很奇怪，在酶切之后對照組中的模板條練居然也還能跑出來（按理說，對照組應(yīng)該不出線條帶才對呀。），結(jié)果跟上面說的差不多，，都是在1000多。我實(shí)在不明白啊，請前輩們幫我解解疑惑吧�。。� |
3樓2011-04-07 09:53:46
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