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041033045009

金蟲 (正式寫手)

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Originally posted by rxm870202 at 2011-04-11 00:00:50:
請教濕法裝柱你們用的是硅膠嗎細(xì)分的話一般用多少目的？我常用200-300目的，有時也用300-400目的，常常是起不到什么分離效果，經(jīng)常是幾個點(diǎn)一塊下來了，郁悶中……

200-300,柱子裝的要實(shí)，洗脫劑的組成及比例很關(guān)鍵……

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21樓2011-04-11 07:59:59

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tonypengt

木蟲 (正式寫手)

荒唐書生

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jiangchunyong(金幣+1, EPI+1): 謝謝！很好！ 2011-04-16 11:34:46

本人認(rèn)為在上柱之前應(yīng)該先通過TLC選好系統(tǒng)，再決定上常壓，加壓，減壓柱（同時決定填料）！
本人經(jīng)驗(yàn)常壓和加壓柱用濕法裝柱效果較好，減壓通常是干法裝柱。
濕法：應(yīng)將填料以TLC選好的系統(tǒng)中極性小的溶劑攪拌均勻（最好超聲超哈）裝柱，裝好后應(yīng)以裝柱溶劑沖洗至填料界面不再下降為宜！
干法（減壓柱）：將填料裝入柱后用橡膠棒輕敲柱壁，填料填好后用水泵抽真空半小時以上；常壓柱沒有抽真空這一步！
通常天化粗分用200-300目硅膠，細(xì)分用300-400目硅膠，條件好的可以用Sephadex LH-20，進(jìn)口40-60微米硅膠，制備液相等分離材料和手段！

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荒唐

22樓2011-04-16 01:31:09

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cj22xmc

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關(guān)于裝柱大家介紹了很多。再介紹一些洗脫劑選擇的經(jīng)驗(yàn)吧，怎樣選擇TLC條件，如何從TLC條件過度到柱層析條件等

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23樓2011-04-16 08:35:46

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zcx039

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慢慢過柱子，，真得很累人的�。】梢圆捎眉訅旱模�！

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天天來報到�。。�

24樓2011-04-16 08:39:13

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cod19852008

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十分感謝大家分享寶貴的經(jīng)驗(yàn)啊，

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25樓2011-04-16 23:17:08

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路基亞的暴誕

金蟲 (正式寫手)

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過柱子經(jīng)驗(yàn)吧

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karl2100(金幣+1): 多謝提供！ 2011-04-17 11:01:44

過柱子經(jīng)驗(yàn)總結(jié)
1、選柱子：現(xiàn)在見到的柱子徑高比一般在1:5-10。
2、稱量：100-300目硅膠，稱30-70倍于上樣量；如果極難分，也可以用100倍量的硅膠書中寫硅膠量是樣品量的30-40倍，具體的選擇要具體分析。如果所需組分和雜質(zhì)分的比較開（是指在所需組分Rf在0.2--0.4，雜質(zhì)相差0.1以上），就可以少用硅膠。
3、選洗脫劑：一般淋洗劑是采用TLC分析得到的展開劑的比例再稀釋一倍后的溶劑。極性小的用乙酸乙酯：石油醚系統(tǒng)；極性較大的用甲醇：氯仿系統(tǒng)；極性大的用甲醇：水：正丁醇：醋酸系統(tǒng)。要使所需點(diǎn)在Rf值在0.2-0.3左右的比較好。常用溶劑的極性順序：石油醚＜環(huán)己烷/己烷＜苯乙醚＜氯仿＜乙酸乙酯＜正丁醇＜丙酮＜乙醇＜甲醇＜水。一般把兩種溶劑混合時，采用高極性/低極性的體積比為1/3的混合溶劑。拖尾可以加入少量氨水或冰醋酸。乙酸乙酯/石油醚= 4:1可用TLC分開。乙酸乙酯和石油醚(60-90)。
4、攪成勻漿：先把硅膠泡在燒杯中，用干硅膠體積一倍的溶劑泡，用超聲波超半個小時，中間看到氣泡時用玻璃棒攪一下。如果洗脫劑是石油醚/乙酸乙酯/丙酮體系，就用石油醚拌；如果洗脫劑是氯仿/醇體系，就用氯仿拌。
5、裝柱：
A、用溶劑把柱子飽和一次，因?yàn)槿軇┖凸枘z飽和時放出的熱量可能使產(chǎn)品分解。 B、將柱底用棉花塞緊，不必用海沙，加入約1/3體積石油醚（氯仿），裝上蓄液球，打開柱下活塞，將勻漿一次傾入蓄液球內(nèi)。隨著沉降，會有一些硅膠沾在蓄液球內(nèi)，用石油醚（氯仿）將其沖入柱中。
C、裝柱時一定要保證無氣泡，同時敲打柱體使柱體更均勻、緊湊，裝畢，用洗脫液沖三次。
6、壓實(shí)：裝柱完后，加入更多的石油醚，用雙聯(lián)球或氣泵加壓，直至流速恒定。柱床約被壓縮至9/10體積。無論走常壓柱或加壓柱，都應(yīng)進(jìn)行這一步，可使分離度提高很多，且可以避免過柱時由于柱床萎縮產(chǎn)生開裂。
7、上樣：干法濕法都可以。
A、在硅膠上層加少量無水硫酸鈉（以免樣品被洗脫劑沖散）取適量樣溶液上樣。上樣后，加入一些洗脫劑，再將一團(tuán)脫脂棉塞至接近硅膠表面。然后就可以放心地加入大量洗脫劑，而不會沖壞硅膠表面。
B、用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開，待溶劑層下降至石英砂面時，再加少量的低極性溶劑，然后再打開活塞，如此兩三次，一般石英砂就基本是白色的了。加入淋洗劑，一開始不要加壓，等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離（2～4cm就夠了），再加壓，這樣避免了溶劑（如二氯甲烷等）夾帶樣品快速下行。
8、過柱和收集：柱層析實(shí)際上是在擴(kuò)散和分離之間的權(quán)衡。太低的洗脫強(qiáng)度并不好，推薦用梯度洗脫。收集的例子：10mg上樣量，1g硅膠H，0.5ml收集餾分；1-2g上樣量，50g硅膠（200-300目），20-50ml收集餾分。接收瓶一定要用可密封的。柱子下面的活塞一定不要涂潤滑劑，會被淋洗劑帶到產(chǎn)品中的。
9、用少量的溶劑溶樣品加樣，加完后將下面的活塞打開。
10、檢測。要更多地使用專用噴顯劑，如果僅用紫外燈，會損失較多產(chǎn)品，紫外的靈敏度一般比噴顯劑底1-2個數(shù)量級。
11、送譜。收集的產(chǎn)品旋干，在送譜前通常需要重結(jié)晶。如果樣品太少或?yàn)橐后w，可過一小凝膠柱，作為送譜前的最后純化手段�？沙渥V1.5ppm左右所謂的“硅膠”峰。

綜合萃取操作
1、選擇有機(jī)溶劑。乙醚是最常用的有機(jī)溶劑，因?yàn)榭煞奖愕赜眯D(zhuǎn)蒸發(fā)儀將其除去。乙酸乙酯也是很好的溶劑，但是它相對比較難被除去。應(yīng)該盡量避免使用二氯甲烷，因?yàn)槎燃淄楸人�，容易形成難以處理的乳狀液和復(fù)雜的物質(zhì)
2、選擇分液漏斗的大小。通常選用125mL或250mL的分液漏斗，較大量的反應(yīng)（1～10g）可以用500mL或1L的分液漏斗。請記�。悍忠郝┒分幸b得下溶劑及洗滌液，兩者在漏斗中必須能完全混合。
3、用所選擇的有機(jī)溶劑稀釋初始反應(yīng)混合物并將其移入選擇好的分液漏斗。大量的原料需要大量的溶劑。常規(guī)反應(yīng)（50～500mg產(chǎn)品）可用25～100mL溶劑來稀釋。
4、洗滌有機(jī)層以除去雜質(zhì)。洗滌相的體積通常是有機(jī)相體積的1/10~1/2。最好重復(fù)洗滌2--3次。酸洗（通常用10%HCl）可以除去胺，堿洗（通常用飽和NaHCO3或10%NaOH）可以除去酸性雜質(zhì)。大多數(shù)情況下，當(dāng)雜質(zhì)既非酸性又非堿性時，可用蒸餾水洗滌，以除去各種無機(jī)雜質(zhì)。（注意：在搖動分液漏斗中的混合液體時，記住要經(jīng)常排氣，排氣時使分液漏斗上沿口朝下，然后上舉，在防護(hù)罩后面打開活塞。這樣可以釋放在搖動液體時產(chǎn)生的氣體壓力。此外，在分液漏斗中放出液體之前，記住首先應(yīng)打開蓋子。）
5、反向萃取回收損失的產(chǎn)品。如果你的產(chǎn)物有水溶性（含有幾個極性基團(tuán)），你可能需要用乙醚或乙酸乙酯反向萃取水層，以避免過多產(chǎn)物流失在水相中�？梢允褂肨LC檢測是否所有產(chǎn)物已經(jīng)從水相中被萃取出。
6、在結(jié)束階段進(jìn)行鹽洗（飽和NaCl溶液）此操作有利于干擾乳化，并且可以除去溶于有機(jī)相中的水，起到“干燥”有機(jī)層的作用。
7、干燥有機(jī)層。將有機(jī)溶液和水相分離之后，在有機(jī)相中加入干燥劑以除去微量的水。通常用高效快速的MgSO4，但MgSO4有輕微的酸性；或用Na2SO4，它的干燥速度稍慢，效率較低，但Na2SO4為中性。這些化合物可以和殘留在有機(jī)溶液中的水結(jié)合，作用后形成團(tuán)塊。加入的干燥劑要適量，只要有一些干燥劑不再結(jié)塊，說明可以不用再加入干燥劑了。
8、在干燥有機(jī)相時，可以準(zhǔn)備抽濾裝置。選擇合適的抽濾瓶和布氏漏斗，剪好兩張和布氏漏斗一樣大小的干凈濾紙（一般墊兩張，防止抽破，濾紙一般比漏斗口徑稍微小一點(diǎn)為最好）。用疊好的濾紙和布氏漏斗將溶液抽濾到抽濾瓶中（注意布氏漏斗抽濾口朝向以及倒吸等情況）。
9、將抽濾瓶中的液體倒入圓底燒瓶中脫溶。為了防止在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)時爆沸，溶液量不要超過圓底燒瓶容量的一半。
10 、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮溶液。然后將產(chǎn)物溶解在少量溶劑中，并將其轉(zhuǎn)入一個稍小的已知重量的圓底燒瓶中。
11、再次旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮溶液。通過濃縮、加入二氯甲烷，然后重復(fù)幾次操作，高沸點(diǎn)的溶劑可被有效地除去。
12、用真空泵除去殘留的溶劑。對于非揮發(fā)性的化合物，可以用真空泵高效地除去殘留的溶劑。這兒有一個加快此過程的竅門：排空圓底燒瓶，充入氮?dú)猓貜?fù)此過程，然后用真空泵抽30分鐘。如果你的產(chǎn)物是揮發(fā)性的（低分子量和/或低沸點(diǎn)），應(yīng)該用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀而不是真空泵抽至樣品恒重。
13、樣品恒重。從真空泵（或旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀）上取下圓底燒瓶，稱重，然后繼續(xù)蒸發(fā)15到30分鐘，再次稱重。一旦連續(xù)兩次得到的重量一樣，你就可以準(zhǔn)備去做NMR測定了。乳化：在進(jìn)行萃取、洗滌操作過程中，混合液在分液漏斗中發(fā)生乳化，形成乳濁液而難以分離，如何消除乳化狀態(tài)可以嘗試采取以下辦法
(一)、長時間靜置將乳濁液放置過夜，一般可分離成澄清的兩層。
(二)、水平旋轉(zhuǎn)搖動分液漏斗當(dāng)兩液層由于乳化而形成界面不清時，可將分渡漏斗在水平方向上緩慢地旋轉(zhuǎn)搖動，這樣可以消除界面處的“泡沫”。促進(jìn)分層。
(三)、用濾紙過濾對于由于有樹脂狀、粘液狀懸浮物存在而引起的乳化現(xiàn)象，可將分液漏斗中的物料，用質(zhì)地密致的濾紙，進(jìn)行減壓過濾。過濾后物料則容易分層和分離。
(四)、加乙醚比重接近l的溶劑，在萃取或洗滌過程中，容易與水相乳化，這時可加入少量的乙醚，將有機(jī)相稀釋，使之比重減小，容易分層。
(五)、補(bǔ)加水或溶劑，再水平搖動向乳化混合物中緩慢地補(bǔ)加水或溶劑，再進(jìn)行水平旋轉(zhuǎn)搖動，則容易分成兩相。至于補(bǔ)加水，還是補(bǔ)加溶劑更有效，可將乳化混合物取出少量，在試管中預(yù)先進(jìn)行試探。
(六)、加乙醇對于有乙醚或氯仿形成的乳化液，可加入5～10滴乙醇，再緩緩搖動，則可促使乳化液分層。但此時應(yīng)注意，萃取劑中混入乙醇，由于分配系數(shù)減小，有時會帶來不利的影響。
(七)、離心分離將乳化混合物移入離心分離機(jī)中，進(jìn)行高速離心分離。
(八)、加無機(jī)鹽及減壓對于乙酸乙酯與水的乳化液，加入食鹽、硫酸銨或氯化鈣等無機(jī)鹽，使之溶于水中，可促進(jìn)分層。另外，將乳化部分取出，小心地溫?zé)嶂?0℃，或用水泵進(jìn)行減壓排氣，都有利于分離。對于由乙醚形成的乳化液，可將乳化部分分出，裝入一個細(xì)長的筒形容器中，向液面上均勻地篩撒充分脫水的硫酸鈉粉末，此時，硫酸鈉一邊吸水，一邊下沉，在容器底部可形成水溶液層。

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26樓2011-04-16 23:42:07

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gyp1271985

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各種分離手段交替使用

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27樓2011-04-17 07:46:04

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OoO_wode

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Originally posted by rxm870202 at 2011-04-09 23:26:40:
慢的話就加大極性個人覺得柱子一定要裝的很緊很緊最近正練習(xí)干法裝柱據(jù)說效果不錯滴的慢洗脫劑的極性就大一點(diǎn) Rf值在0.2-0.3就行注意若不是粗分展開劑的極性要保持一樣不要梯度洗脫與君共勉

大孔干法上柱？

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我的

28樓2011-04-23 00:06:09

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xTerry

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剛剛學(xué)著過柱子，受教了，謝謝各位

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29樓2011-04-23 13:25:38

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rxm870202

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Originally posted by OoO_wode at 2011-04-23 00:06:09:
大孔干法上柱？

我用的都是硅膠柱

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troubleisafriend

30樓2011-04-24 10:44:30

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