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feiye2214木蟲 (正式寫手)
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【求助】再來一張圖，怎么提高特異性？提高Tm？ 已有3人參與
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怎么提高特異性？提高Tm？ |
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holyala
木蟲 (著名寫手)
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2樓2011-04-07 16:50:12
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小木蟲(金幣+0.5):給個(gè)紅包，謝謝回帖交流
看天(金幣+2, EPI+1): 鼓勵(lì)自主申請(qǐng)EPI 2011-04-07 17:07:00
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看天(金幣+2, EPI+1): 鼓勵(lì)自主申請(qǐng)EPI 2011-04-07 17:07:00
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1：Tm值合適即可，無需提高，提高有可能就會(huì)導(dǎo)致條帶亮度減弱或者沒有條帶 2：循環(huán)數(shù)其實(shí)也和P出的條帶有部分關(guān)系，關(guān)鍵是看你干什么了， 如果是擴(kuò)增基因用于下游工作，那么循環(huán)數(shù)建議多一些，30-35個(gè)循環(huán)，如果只是為了驗(yàn)證，那么20-25個(gè)循環(huán)即可。 3：你的雜帶比較多，模板用的是什么，可以用基因組當(dāng)模板，純度高一些，菌液的話可以少加一些。 4：非特異性帶多同時(shí)也說明可酶效率太高了，一些沒用的帶也P出來了，體系中酶量稍微減少一些； 5：其實(shí)你圖中的亮度很不錯(cuò)了，不過如果要做下游工作也完全沒有必要改變Tm值以及其他了，你大批量做一下PCR，然后跑電泳全點(diǎn)，然后切膠純化將你的目的片段純化出來即可。 |
3樓2011-04-07 17:02:14
blackrose8089
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4樓2011-04-07 18:00:22
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