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[求助]
5‘Race擴不出帶，求高手指點
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本人最近做5‘Race，得到如下圖。望高手解釋下可能問題出在哪里呢？先在此謝過了。 |
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shaquila
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【答案】應(yīng)助回帖
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根據(jù)我的經(jīng)驗，如果是5race，做第一次pcr時候很難獲得清晰條帶，而且即使有帶，也大部分是rRNA，這些條帶做二次pcr依舊清晰無比，測序回來才發(fā)現(xiàn)悲劇 除非你的pcr酶，引物，模版都很好，所以我不大建議做td或者摸索條件，這會耗費大量時間 而是用nested pcr，多設(shè)計引物，第一輪把所有g(shù)sp用55或者60做pcr（根據(jù)引物tm確定退火，別把退火弄得太高，很多manual說要把tm設(shè)計>70，除非你不做nested pcr，想一次出帶，否則無所謂），如果結(jié)果不是空白，把product稀釋100－200 倍，用inner gsp進行pcr，如果有清晰的帶，恭喜你拉 |
7樓2011-04-18 13:57:58
2樓2011-04-18 09:05:09
shaquila
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3樓2011-04-18 09:11:54
sai00fuji
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4樓2011-04-18 11:10:28
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