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[求助]
求問(wèn)一個(gè)百思不得其解的問(wèn)題！
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在做某個(gè)纖維素酶基因的大腸桿菌胞內(nèi)表達(dá)和畢赤酵母中的胞外表達(dá)，都實(shí)現(xiàn)了預(yù)期目標(biāo)，可是在測(cè)定比活力（IU/mg）時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的現(xiàn)象： 大腸桿菌表達(dá)為胞內(nèi)，因此采用凍融破胞后，測(cè)定破胞液的總蛋白量，計(jì)算比活力；而畢赤酵母表達(dá)是胞外分泌，因此直接取發(fā)酵上清液測(cè)定總蛋白量計(jì)算比活力。計(jì)算結(jié)果，后者是前者的一半！ 這個(gè)這么解釋��？一般來(lái)說(shuō)，酵母表達(dá)體系不是更有利于外源基因的表達(dá)嗎？怎么比活力反而會(huì)低于細(xì)菌呢？ P.S.該目的基因富含AT，來(lái)自真菌 |
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5樓2011-04-22 23:04:37
西瓜
榮譽(yù)版主 (知名作家)
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2樓2011-04-22 22:00:58
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★
1949stone(金幣+4): 鼓勵(lì) 2011-04-23 10:57:51
1949stone(金幣+4): 鼓勵(lì) 2011-04-23 10:57:51
| 我就我的知識(shí)說(shuō)點(diǎn)自己的想法。雖然目的基因來(lái)自真核細(xì)胞，在原核細(xì)胞上實(shí)現(xiàn)表達(dá)比較困難，因?yàn)樵思?xì)胞沒(méi)有真核基因表達(dá)所需的一些調(diào)控序列。但是一旦發(fā)生了表達(dá)了，我們就不應(yīng)該考慮這方面的因素了，而應(yīng)該從你提取這種蛋白的方法等上面找原因了。或者有偶然因素在里面，比如，存在基因多拷貝呢？希望高人指正�。� |
3樓2011-04-22 22:28:31
elvias
鐵桿木蟲(chóng) (正式寫手)
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4樓2011-04-22 22:32:02
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