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求問一個(gè)百思不得其解的問題!
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在做某個(gè)纖維素酶基因的大腸桿菌胞內(nèi)表達(dá)和畢赤酵母中的胞外表達(dá),都實(shí)現(xiàn)了預(yù)期目標(biāo),可是在測定比活力(IU/mg)時(shí)發(fā)現(xiàn)一個(gè)奇怪的現(xiàn)象: 大腸桿菌表達(dá)為胞內(nèi),因此采用凍融破胞后,測定破胞液的總蛋白量,計(jì)算比活力;而畢赤酵母表達(dá)是胞外分泌,因此直接取發(fā)酵上清液測定總蛋白量計(jì)算比活力。計(jì)算結(jié)果,后者是前者的一半! 這個(gè)這么解釋?一般來說,酵母表達(dá)體系不是更有利于外源基因的表達(dá)嗎?怎么比活力反而會(huì)低于細(xì)菌呢? P.S.該目的基因富含AT,來自真菌 |
鐵桿木蟲 (正式寫手)
榮譽(yù)版主 (知名作家)
| 我就我的知識(shí)說點(diǎn)自己的想法。雖然目的基因來自真核細(xì)胞,在原核細(xì)胞上實(shí)現(xiàn)表達(dá)比較困難,因?yàn)樵思?xì)胞沒有真核基因表達(dá)所需的一些調(diào)控序列。但是一旦發(fā)生了表達(dá)了,我們就不應(yīng)該考慮這方面的因素了,而應(yīng)該從你提取這種蛋白的方法等上面找原因了。或者有偶然因素在里面,比如,存在基因多拷貝呢?希望高人指正!! |

鐵桿木蟲 (正式寫手)
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