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lucky20511木蟲 (小有名氣)
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[求助]
關(guān)于作液相標(biāo)準(zhǔn)曲線的若干問題
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我是新手，從來沒做過液相的標(biāo)準(zhǔn)曲線，現(xiàn)在想用外標(biāo)法做兒茶素的標(biāo)準(zhǔn)曲線，想請教一下各位大俠下面這些問題： 1、標(biāo)準(zhǔn)曲線要取5個點(diǎn)？如何取？（在木蟲搜過有人說范圍一般要求3個數(shù)量級，其中最高和最低濃度要包括所測樣品濃度80%和120%，是這樣嗎？） 2、各濃度的標(biāo)樣的混合標(biāo)樣和單標(biāo)要進(jìn)幾針？取平均值？ 3、一般隔多久要重新做標(biāo)準(zhǔn)曲線？ 4、看過一些文獻(xiàn)，很多人做液相的標(biāo)準(zhǔn)曲線還會做精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性，加樣回收率試驗(yàn)，這些實(shí)驗(yàn)一定要做嗎？ |
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cuizy2007
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【答案】應(yīng)助回帖
lucky20511(金幣+6): 謝謝你的回復(fù)，今天問了一個做液相的老師，她說的跟你說的差不多，非常感謝！ 2011-04-28 11:23:03
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1、可以按照這個規(guī)則來做標(biāo)準(zhǔn)曲線； 2、在儀器穩(wěn)定的前提下，躲進(jìn)幾次樣取平均值當(dāng)然最好，不過一般3-5次足矣，如果有明顯的異常值一定要去除； 3、每次試驗(yàn)的時候可以選取工作曲線某個點(diǎn)（最好中間濃度）重新進(jìn)樣，其儀器響應(yīng)如果無明顯變化則不用重新做，否則需要重新做； 4、一定要做，這些參數(shù)是方法可靠性的保證，只有這些參數(shù)滿意你的數(shù)據(jù)才可信。 |
2樓2011-04-28 09:31:35
【答案】應(yīng)助回帖
lucky20511(金幣+4): 謝謝你分享的經(jīng)驗(yàn)！我也要查查資料看具體怎么做精密度、穩(wěn)定性、重復(fù)性，加樣回收率試驗(yàn)了~ 2011-04-28 22:33:10
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1 回收率是確定方法準(zhǔn)確度的，在樣品中加標(biāo)，測定回收率在90%~110%即可，定量分析要求給出 2 精密度表示多次測量的符合程度，標(biāo)準(zhǔn)偏差或相對標(biāo)準(zhǔn)偏差表示。每點(diǎn)3~5次，大偏差數(shù)據(jù)可刪除 3 最好湊齊樣品，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，在相同測試條件下測定。如果隔天測試，需選擇1~2個點(diǎn)測定，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比對，無明顯差異，可使用。差差異明顯，需重做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 4 外標(biāo)法進(jìn)樣量，要嚴(yán)格控制。 |
3樓2011-04-28 10:15:46
lucky20511
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4樓2011-04-28 22:27:51
lucky20511
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5樓2011-04-28 22:30:23
cuizy2007
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【答案】應(yīng)助回帖
lucky20511(金幣+3): 謝謝你再次詳細(xì)的回答！進(jìn)樣環(huán)就是定量環(huán)吧，我們的是20uL的~ 2011-04-30 10:40:22
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回答一下樓主上述兩個問題： 手動進(jìn)樣精確控制最好是用進(jìn)樣環(huán)，比如你們進(jìn)樣量是50，那就選取50 uL的進(jìn)樣環(huán)，進(jìn)樣針取樣略多于50即可，進(jìn)樣環(huán)可以自動將多余溶液切換至廢液。如果沒有進(jìn)樣環(huán)，采用進(jìn)樣針控制進(jìn)樣量也是可以的，只是注意抽拉進(jìn)樣針的時候不要有氣泡； “儀器響應(yīng)如果無明顯變化”包括出峰時間和峰面積，都不能有明顯變化，出峰時間一般用于定性，而峰面積用于定量。 還有另外一點(diǎn)兒建議，就是最好找熟悉實(shí)驗(yàn)流程的師兄師姐帶你做一遍，你就很快可以上手，自己摸索的話會花相對比較長的時間，而且有些概念（回收率、穩(wěn)定性、精密度等）對于實(shí)際樣品分析有一些復(fù)雜的細(xì)節(jié)問題容易搞混，當(dāng)然只是做一個儀器方法，進(jìn)標(biāo)準(zhǔn)的話還是比較容易理解的，呵呵！ |
6樓2011-04-29 12:27:10
方園園1207
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7樓2014-04-23 16:19:04
8樓2014-08-27 10:09:48
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