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有關(guān)穩(wěn)轉(zhuǎn)NF-kB螢光素酶報告基因的問題
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| 在一本書上看到過這樣幾句話：“用脂質(zhì)轉(zhuǎn)染法將pElam-kB-luc質(zhì)粒和pcDAN3.1-GFP（篩選用）以及pcDAN3.1質(zhì)粒和pcDAN3.1-GFP質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293，加入G418，......選擇篩選和維持篩選分別歷時4周和6周，已獲得穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的HEK293/kB-luc細(xì)胞株，擴(kuò)增HEK293/kB-luc細(xì)胞2至3代用于實(shí)驗(yàn)�！蔽也欢髡甙裵Elam-kB-luc質(zhì)粒和pcDAN3.1-GFP共轉(zhuǎn)染細(xì)胞的目的，那個pcDAN3.1-GFP是用來做內(nèi)參的？好像不是，我不是很理解。另外作者為什么又把pcDAN3.1質(zhì)粒和pcDAN3.1-GFP質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞呢？還請老師指點(diǎn)。非常感謝。 |
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elvias
鐵桿木蟲 (正式寫手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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1949stone(金幣+2): 2011-04-28 19:00:52
1949stone(金幣+2): 2011-04-28 19:00:52
| 我看到你這個，我才發(fā)現(xiàn)你之前的帖子我理解錯了。這種共轉(zhuǎn)染篩選是可以的，但是我個人覺得假陽性比較高，還是單轉(zhuǎn)比較好，但是涉及到報告基因時，這種方法要更方便。你說的文章中，如果為了得到HEK293/kB-luc細(xì)胞株，我覺得共轉(zhuǎn)的目的有兩個1為增加篩選抗性2通過GFP檢測轉(zhuǎn)染效率，優(yōu)化篩選，因?yàn)橹挥袡z測到GFP的細(xì)胞株才可能得到穩(wěn)轉(zhuǎn)株。后面的共轉(zhuǎn)看你的描述我也不太清楚~你能否在說詳細(xì)一點(diǎn)。 |
2樓2011-04-28 17:35:01
elvias
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★ ★
1949stone(金幣+2): 連續(xù)鼓勵 2011-04-28 19:01:21
董珍珍(金幣+5): 感謝！ 2011-04-28 20:09:34
1949stone(金幣+2): 連續(xù)鼓勵 2011-04-28 19:01:21
董珍珍(金幣+5): 感謝！ 2011-04-28 20:09:34
| 一般共轉(zhuǎn)染要設(shè)立3組，包括陽性對照、陰性對照和實(shí)驗(yàn)組。陽性對照是指僅轉(zhuǎn)染有抗性基因的質(zhì)粒組，陰性對照指僅轉(zhuǎn)染有目的基因的質(zhì)粒組，實(shí)驗(yàn)組指共同轉(zhuǎn)染兩種質(zhì)粒的組。實(shí)驗(yàn)組兩種質(zhì)粒要有一個合適的比例，一般來講抗性質(zhì)粒：構(gòu)建質(zhì)粒=1：10。一般來說是篩選質(zhì)粒要比構(gòu)建質(zhì)粒多。 |
3樓2011-04-28 17:37:56
4樓2011-04-28 20:24:50
elvias
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5樓2011-04-28 21:44:05
6樓2011-04-29 14:33:46
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