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syn1985木蟲 (正式寫手)
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[求助]
我的放線菌細胞壁很難破，求助各位大蝦
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我想構(gòu)建基因組文庫，可是前面DNA提取就很頭疼，按照操作手冊上寫的加入2mg/ml的溶菌酶破壁，但是水浴2h都不行，后來我把溶菌酶的濃度提高到10mg/ml還是不行，有沒有誰有好的破壁方法啊。 |
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charon1982
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4樓2011-05-04 09:10:12
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charon1982
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9樓2011-05-04 16:29:31
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2樓2011-05-04 00:42:43
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5樓2011-05-04 09:16:57
【答案】應(yīng)助回帖
★ ★
syn1985(金幣+2): 謝謝 這個方法我試過 提取的DNA長度不夠 2011-05-04 15:35:11
rainwander(金幣+2): 鼓勵交流 2011-05-05 17:28:54
rainwander(EPI+1): 2011-05-05 17:29:50
syn1985(金幣+2): 謝謝 這個方法我試過 提取的DNA長度不夠 2011-05-04 15:35:11
rainwander(金幣+2): 鼓勵交流 2011-05-05 17:28:54
rainwander(EPI+1): 2011-05-05 17:29:50
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建議用以下方法試一下： 取0.15g新鮮菌體于研缽(-20℃預冷)中,反復液氮研磨至細粉狀,迅速平均分裝至2個1.5mL離心管中;加TE Buffer 550μL,加65℃預熱的20% SDS溶液30μL,漩渦振蕩5s,加20mg/mL蛋白酶K 20μL,輕輕混勻,37℃保溫1h;加等體積Tris飽和酚/氯仿/異戊醇(25∶24∶1)抽提,輕微顛倒混勻,10000r/min離心10min;小心吸取上清至新離心管中,加等體積氯仿/異戊醇(24∶1)抽提,10000r/min離心5min,吸取上清液與等體積異丙醇(4℃預冷)混勻,然后10000r/min離心3min,棄上清。沉淀用1mL 70%乙醇(4℃預冷)洗滌1min,自然風干,加入40μL TE溶解,-20℃保存?zhèn)溆谩?br /> 本人做過，效果還可以 |
7樓2011-05-04 14:24:37
charon1982
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10樓2011-05-04 16:31:26
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