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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 抽提質粒
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抽提質粒
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大家?guī)兔纯次页榈倪@個質粒圖，看我的質粒有沒有斷開？因為我每次抽提都書兩條以上的條帶，沒有單條帶的，很郁悶。謝謝各位蟲友�。。。� |
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 【分子生物】EPI帖 |
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2樓2011-05-05 14:22:55
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小木蟲(金幣+0.5):給個紅包，謝謝回帖
475502411(金幣+2): 2011-05-07 15:58:21
dhd997(金幣+5, EPI+1): 夠熱心 2011-05-07 17:46:03
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dhd997(金幣+5, EPI+1): 夠熱心 2011-05-07 17:46:03
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正常質粒被提取后，會有三種形態(tài)：分別是超螺旋形、開環(huán)型、線型。三種質粒因結構不同，在凝膠電泳時的速度也會不同，超螺旋形跑的最快，其次是線型，最后是開環(huán)型。具體相關資料如下： 從細菌中分離質粒DNA的方法都包括3個基本步驟:培養(yǎng)細菌使質粒擴增；收集和裂解細胞;分離和純化質粒DNA。采用溶菌酶可以破壞菌體細胞壁,十二烷基磺酸鈉(SDS)和Triton X-100可使細胞膜裂解。經(jīng)溶菌酶和SDS或Triton X-100處理后,細菌染色體DNA會纏繞附著在細胞碎片上,同時由于細菌染色體DNA比質粒大得多,易受機械力和核酸酶等的作用而被切斷成不同大小的線性片段。當用強熱或酸、堿處理時，細菌的線性染色體DNA變性,而共價閉合環(huán)狀DNA(Covalently closed circular DNA，簡稱cccDNA)的兩條鏈不會相互分開，當外界條件恢復正常時，線狀染色體DNA片段難以復性,而是與變性的蛋白質和細胞碎片纏繞在一起,而質粒DNA雙鏈又恢復原狀,重新形成天然的超螺旋分子,并以溶解狀態(tài)存在于液相中。 在細菌細胞內(nèi),共價閉環(huán)質粒以超螺旋形式存在。在提取質粒過程中，除了超螺旋DNA外，還會產(chǎn)生其它形式的質粒DNA。如果質粒DNA兩條鏈中有一條鏈發(fā)生一處或多處斷裂,分子就能旋轉而消除鏈的張力,形成松馳型的環(huán)狀分子,稱開環(huán)DNA(Open circular DNA, 簡稱 ocDNA)；如果質粒DNA的兩條鏈在同一處斷裂,則形成線狀DNA(Linear DNA)。當提取的質粒DNA電泳時,同一質粒DNA其超螺旋形式的泳動速度要比開環(huán)和線狀分子的泳動速度快。 |
11樓2011-05-07 15:54:36
12樓2011-05-11 17:48:01
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