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[交流]
融合蛋白在大腸桿菌中的表達，怎么被我越做越復雜了？ 已有5人參與
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剛入手做分子克隆的東西，導師給了個蛋白原核表達的實驗，練練手。 主要就是找個蛋白的序列，連接到PET21中，在大腸桿菌表達體系中進行表達，并且用His-tag進行純化。全序列都是公司合成的，并且還幫我連到了pet21上。第一次老師帶著做的，第二次自己做的，純化后得到的結果也不錯。可是后來自己又表達了幾次，都掛不上鎳住了。再后來，做著做著，蛋白竟然不表達了，感覺特別匪夷所思。不過每次都是可溶表達，我還是挺有安慰的。大家有沒有碰到類似的情況啊，求建議。 是不是我的原理沒有搞清楚，但是感覺都是按照分子克隆上的操作進行的，而且每次自己不確定的都會問老師的。這個實驗都做了半年了，越做越沮喪，蛋白的后續(xù)功能實驗都還沒進行呢。而且實驗還是借別人的實驗室做的，我都不好意思了。 哎，什么時候能看到希望呢，過來人給點鼓勵吧。 |
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lihuaannie
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