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zhl8101銀蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
殺死微生物
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我的實(shí)驗(yàn)是用纖維素酶水解纖維素，最后檢測(cè)還原糖含量，但溶液中有微生物，它的生長(zhǎng)要消耗糖，會(huì)影響我的檢測(cè)結(jié)果。能不能加入一種化學(xué)物質(zhì)殺死微生物，而不對(duì)酶產(chǎn)生影響？或者別的方法也行。 水解pH為5.5。 我說(shuō)的水解就是單純的酶水解，不是發(fā)酵。微生物只會(huì)降低我的糖含量。 謝謝了！ |
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12樓2011-05-13 19:01:48
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【答案】應(yīng)助回帖
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scelab(金幣+5, EPI+1): 熱心蟲(chóng)友，歡迎多來(lái)交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2011-05-14 01:50:08
scelab(金幣+5, EPI+1): 熱心蟲(chóng)友，歡迎多來(lái)交流~~~:tiger06::tiger28::tiger23: 2011-05-14 01:50:08
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1、 pH值是5.5不算太酸，微生物肯定是能夠生長(zhǎng)的。 2、 30個(gè)小時(shí)其實(shí)也不一定算長(zhǎng)，酶解實(shí)驗(yàn)我們用生淀粉酶降解過(guò)3天的，完全可以成功（見(jiàn)附件）。 3、 什么底物，是結(jié)晶纖維素還是CMC還是預(yù)處理甘蔗渣什么的，可溶不可溶？ 4、 溫度多少？我們?cè)囘^(guò)在40度降解三天的，最后看降解率。如果溫度較高，那么微生物比較難生長(zhǎng)，但溫度太高酶容易失去活力，像50度放30個(gè)小時(shí)，大多數(shù)纖維素酶都會(huì)失活大半。這個(gè)問(wèn)題也要注意。 5、 在反應(yīng)體系中加入抗生素算是浪費(fèi)，而且微生物那么多，不可能全都抑制完的。加有毒物質(zhì)也對(duì)人不安全，我覺(jué)得還是將可溶的東西過(guò)濾除菌的好。如果底物不可溶，那就只將酶液過(guò)濾，最好用0.22微米的濾膜，用0.45微米的沒(méi)那么保險(xiǎn)。如果覺(jué)得過(guò)濾速度很慢，就將酶液離心好一些，先用0.45微米濾膜過(guò)濾，再用0.22微米的濾膜過(guò)濾，速度會(huì)較快。30個(gè)小時(shí)沒(méi)必要用超凈臺(tái)，微生物主要是酶液里原本帶有的，空氣中的很少。 6、 酶解反應(yīng)的時(shí)候要塞住瓶口，不然水分蒸發(fā)，微生物也會(huì)進(jìn)去。 |
14樓2011-05-14 01:46:06
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【答案】應(yīng)助回帖
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我還有些想法，不知道你們是不是已經(jīng)做過(guò)了，就多嘴一下，別嫌我啰嗦，如果已經(jīng)想到了就當(dāng)我這帖是浮云放過(guò)了。 1、溫度 50度對(duì)于中溫纖維素酶來(lái)說(shuō)，30個(gè)小時(shí)有可能會(huì)失活，之前有沒(méi)有做過(guò)這個(gè)酶的溫度耐受性？為什么要選用這個(gè)溫度？在同步糖化發(fā)酵中，酵母不能耐受50度的，最好是在30至35度下生長(zhǎng)和發(fā)酵，也最好最高不高于40度，你這個(gè)實(shí)驗(yàn)?zāi)康氖鞘裁矗咳绻皇窍氡嬲J(rèn)這個(gè)酶是內(nèi)切還是外切的話，那么溫度可以不處于30-40度，假如后續(xù)實(shí)驗(yàn)還要用來(lái)做同步糖化發(fā)酵的話，建議考慮一下降低溫度。你選擇50度是不是因?yàn)檫@個(gè)酶在50度降解速度最快？ 2、小麥秸稈 預(yù)處理的時(shí)候不知道是不是酸堿處理和爆破，pH值必須處理好，用上緩沖液來(lái)溶解，以防止內(nèi)部的酸堿物質(zhì)不能及時(shí)釋放出來(lái)，在纖維素降解的時(shí)候泡出來(lái)破壞了設(shè)定好的pH值。還有就是顆粒大小要夠小�，F(xiàn)在有些機(jī)構(gòu)可以自己做預(yù)處理，多請(qǐng)教別人。當(dāng)然如果是能購(gòu)買來(lái)的話，就不用考慮這些了。 3、酶 純化過(guò)的還是自己篩選得到的微生物產(chǎn)的粗酶液？假如這個(gè)酶是β-葡萄糖苷酶，那么很可能不能降解纖維素，那么這個(gè)實(shí)驗(yàn)就不用做了，之前有沒(méi)有什么實(shí)驗(yàn)?zāi)苷f(shuō)明這個(gè)酶是不是β-葡萄糖苷酶？ 4、過(guò)濾 因?yàn)轭A(yù)處理小麥秸稈不能用0.22微米的濾膜過(guò)濾，所以可以先將酶和緩沖液過(guò)濾，與底物混合之后再調(diào)節(jié)pH值到5.5，調(diào)節(jié)的速度可以快一些，不耽誤多少時(shí)間的。底物和酶的加入有可能會(huì)影響體系的pH值的，影響或多或少都會(huì)有，混合之前一定要保證pH值是自己所設(shè)定的。 反正30個(gè)小時(shí)不算太長(zhǎng)，這個(gè)實(shí)驗(yàn)還是可以成功的。 |
18樓2011-05-14 16:16:34
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