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C-JingX金蟲 (小有名氣)
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[求助]
雙酶切切不開(kāi)
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| 求助：最近構(gòu)建重組質(zhì)粒，用到雙酶切，兩個(gè)限制性酶分別是EcoR I和EcoR v（只有這兩個(gè)酶可以用），酶切總是切不開(kāi)，藍(lán)白斑篩選時(shí)全是藍(lán)斑，而且這兩個(gè)酶切位點(diǎn)在我的質(zhì)粒上是毗鄰的。想問(wèn)一下，這種一個(gè)粘性末端酶和一個(gè)平末端酶，酶切應(yīng)該怎么做？ |
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C-JingX
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9樓2011-05-14 18:36:36
你可以一個(gè)酶少加點(diǎn)，時(shí)間要充足。 2樓2011-05-13 18:43:03
C-JingX
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3樓2011-05-13 20:29:54
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★
scelab(金幣+3): 謝謝交流 2011-05-14 10:10:44
C-JingX(金幣+2): 謝謝 2011-05-14 18:32:10
scelab(金幣+3): 謝謝交流 2011-05-14 10:10:44
C-JingX(金幣+2): 謝謝 2011-05-14 18:32:10
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首先我們分析一下，是切不開(kāi)還是連不上 1.由于這兩個(gè)酶切微點(diǎn)毗鄰，你拿載體另外一個(gè)位置上的酶切位點(diǎn)分別和它們這兩個(gè)做雙酶切，鑒定一下這兩個(gè)酶切位點(diǎn)能否切開(kāi)。（電泳檢測(cè)） 2.理論上，一個(gè)平末端和一個(gè)粘末端是很好連接的。實(shí)在擔(dān)心，你可以酶切后去磷酸化處理一下 |
4樓2011-05-14 01:10:48
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