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[求助]
細(xì)胞融合融合率好低
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| 我上周五做了次細(xì)胞融合。。今天看了融合率好低不到10%。。我用的是自己配的PEG4000，50%。。。我融合時(shí)候作用時(shí)間有點(diǎn)長(zhǎng)，，用了兩分鐘。。。我同學(xué)上次用了一分鐘她融合率差不多60%。。�？墒且膊桓甙 �。各位大俠是怎么做到那個(gè)高的融合率的？。。。我身心憔悴啊。。 |
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chenyyy
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9樓2011-08-12 10:00:30
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【答案】應(yīng)助回帖
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adslye(金幣+3): 感謝應(yīng)助~祝順利！ 2011-08-12 10:26:25
silicare(BioEPI+1): 2011-08-12 16:00:26
adslye(金幣+3): 感謝應(yīng)助~祝順利！ 2011-08-12 10:26:25
silicare(BioEPI+1): 2011-08-12 16:00:26
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看了你的描述，我大概知道原因了，以下幾點(diǎn)： 1.PEG最好是購(gòu)買(mǎi)Sigma的，這是很關(guān)鍵的融合劑，特別是生手，我實(shí)在不敢恭維你配置的效果，做到熟練了再考慮自己配PEG； 2.PEG2000,4000,6000，分子量越大，越稠，毒性也越強(qiáng)，你要選擇合適分子量的PEG，買(mǎi)sigma的，一般用0.8ml就夠了； 3.融合時(shí)間的控制，一般為90s，不能太長(zhǎng)，否則細(xì)胞因毒性大，而出現(xiàn)死亡，融合完，立即用1640培養(yǎng)基（不加FBS）終止融合，5min，前2min同融合時(shí)速度，后3min逐漸加快； 4.SP2/0的狀態(tài)也一定要好，不然效率也不高； 5.本人只是有限，其它請(qǐng)其它大蝦補(bǔ)充； |
4樓2011-06-18 08:49:13
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