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[交流] 酶切條帶

很奇怪的一件事，酶切完電泳條帶與PCR產(chǎn)物對(duì)比，多了一條大于PCR產(chǎn)物的條帶？？求解~~~

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1樓 2011-05-17 20:47:42

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lxj341401

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xwsooo(金幣+1): 2011-05-17 20:52:55

難道出現(xiàn)酶切產(chǎn)物自連？！

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2樓2011-05-17 20:49:42

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Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 20:49:42:
難道出現(xiàn)酶切產(chǎn)物自連？！

請(qǐng)賜教？我發(fā)現(xiàn)幾率大概1/3。。。

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3樓2011-05-17 20:51:08

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Originally posted by lxj341401 at 2011-05-17 20:49:42:
難道出現(xiàn)酶切產(chǎn)物自連？！

我做了三種PCR產(chǎn)物濃度，發(fā)現(xiàn)濃度最大的倒是切出合理的條帶數(shù)目了（雖然在3%膠上與marker對(duì)比，與預(yù)計(jì)大小有些出入），濃度最小的是smear模糊了，中等濃度的就產(chǎn)生比PCR產(chǎn)物還大幾十個(gè)bp 的片段，非常的不解~~·

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4樓2011-05-17 21:08:12

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lijunj

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xwsooo(金幣+2): 2011-05-18 08:07:38
dhd997(金幣+2): 鼓勵(lì)交流 2011-05-19 12:44:28

是不是PCR產(chǎn)物序列中含有兩個(gè)相同的酶切位點(diǎn)？

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5樓2011-05-17 22:58:01

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Originally posted by lijunj at 2011-05-17 22:58:01:
是不是PCR產(chǎn)物序列中含有兩個(gè)相同的酶切位點(diǎn)？

是的，而且不止兩個(gè)，除了SNP處的酶切位點(diǎn)之外，分別在在上下游引物結(jié)合靶序列處還各有一個(gè)相同的酶切位點(diǎn)。。。而我現(xiàn)在的PCR產(chǎn)物已經(jīng)是290多bp大小了

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6樓2011-05-18 08:07:18

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Originally posted by lijunj at 2011-05-17 22:58:01:
是不是PCR產(chǎn)物序列中含有兩個(gè)相同的酶切位點(diǎn)？

但是大小怎么就大于PCR產(chǎn)物呢，難道真的是連接上去了么�。�！

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7樓2011-05-18 08:09:47

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8樓2011-05-19 09:06:15

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xwsooo(金幣+1): 2011-05-20 08:59:32

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Originally posted by xwsooo at 2011-05-17 20:47:42:
很奇怪的一件事，酶切完電泳條帶與PCR產(chǎn)物對(duì)比，多了一條大于PCR產(chǎn)物的條帶？？求解~~~

可能酶切位點(diǎn)不止一個(gè)，仔細(xì)核對(duì)下酶切位點(diǎn)的專一性~

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9樓2011-05-19 18:11:23

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Originally posted by beautybanana at 2011-05-19 18:11:23:
可能酶切位點(diǎn)不止一個(gè)，仔細(xì)核對(duì)下酶切位點(diǎn)的專一性~

是的，我在上面已經(jīng)說(shuō)啦，而且不止兩個(gè)，除了SNP處的酶切位點(diǎn)之外，分別在在上下游引物結(jié)合靶序列處還各有一個(gè)相同的酶切位點(diǎn)。。。而我現(xiàn)在的PCR產(chǎn)物已經(jīng)是290多bp大小了

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10樓2011-05-20 08:59:25

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天使托

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xwsooo(金幣+1): 2011-05-20 14:18:10

難道污染了。。。。

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11樓2011-05-20 09:10:57

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xwsooo(金幣+1): 2011-05-20 14:18:05

這個(gè)大概就要重新?lián)Q酶切位點(diǎn)了，改用別的單一酶切位點(diǎn)~

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12樓2011-05-20 13:34:27

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Originally posted by beautybanana at 2011-05-20 13:34:27:
這個(gè)大概就要重新?lián)Q酶切位點(diǎn)了，改用別的單一酶切位點(diǎn)~

啊，我酶切的目的是區(qū)分基因型，在SNP點(diǎn)能區(qū)分兩個(gè)不同基因型的就是這個(gè)酶切位點(diǎn)啊~~~

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13樓2011-05-20 14:17:03

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Originally posted by 天使托 at 2011-05-20 09:10:57:
難道污染了。。。。

啊，是被CR產(chǎn)物污染？不解~~

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14樓2011-05-20 14:17:44

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xwsooo(金幣+1): 2011-05-20 15:09:00

你把可能的原因一一列出來(lái)，然后再針對(duì)各種原因加以實(shí)驗(yàn)證明，最后才會(huì)解決你的問(wèn)題，這是分析問(wèn)題與解決問(wèn)題的過(guò)程，建議你自己加以體會(huì)，肯定會(huì)受益的~

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15樓2011-05-20 15:00:43

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哭死~~~~換了對(duì)引物，PCR條帶也不錯(cuò)，還是產(chǎn)生比PCR產(chǎn)物大100-200bp的三，四條片段啊，這哪里是酶切啊，越切越大，5555~~~·

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17樓2011-05-26 12:48:27

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誰(shuí)也有遇到同樣問(wèn)題的幫幫我啊，心里真是太受打擊了

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18樓2011-05-26 12:49:24

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西瓜

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酶過(guò)期了沒(méi)……

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19樓2011-05-26 14:42:49

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Originally posted by 西瓜 at 2011-05-26 14:42:49:
酶過(guò)期了沒(méi)……

剛送來(lái)不久啊

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20樓2011-05-26 15:10:20

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繼續(xù)頂，還木有解決問(wèn)題，單酶切產(chǎn)生比PCR產(chǎn)物還大的片段，切下來(lái)的小片段不見(jiàn)了

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21樓2011-06-09 07:54:44

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zhcosa

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如果實(shí)在找不到原因，建議PCR重做，重新純化、電泳，酶切體系的全部試劑更新。

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22樓2011-06-09 08:54:05

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簡(jiǎn)單回復(fù)

xwsooo16樓

2011-05-20 15:09 回復(fù)

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Originally posted by beautybanana at 2011-05-20 15:00:43: 你把可能的原因一一列出來(lái)，然后再針對(duì)各種原因加以實(shí)驗(yàn)證明，最后才會(huì)解決你的問(wèn)題，這是分析問(wèn)題與解決問(wèn)題的過(guò)程，建議你自己加以體會(huì)，肯定會(huì)受益的~

嗯